乌司他丁对急性肝功能衰竭大鼠肝组织中CD163/HO-1变化的影响

摘要

目的： 急性肝功能衰竭(acute liver failure，ALF)是一种严重的临床综合征，常导致大量的肝细胞坏死，病死率非常高，其发病机制和治疗措施一直是研究的焦点。本实验探讨乌司他丁对急性肝功能衰竭的保护作用及对CD163和血红素加氧酶-1(hemeoxygenase-1，HO-1)的影响。 方法： 通过腹腔联合注射D-氨基半乳糖(D-Gal)和脂多糖(LPS)，建立急性肝功能衰竭大鼠模型。186只SD雄性健康大鼠，随机分为3组：Ⅰ组为对照组(6只)，腹腔注射0.9％NaCl2ml；Ⅱ组为模型组(75只)，腹腔联合注射800mg/kg D-Gal和40μg/kg LPS，30min后腹腔注射0.9％NaCl0.4ml；Ⅲ组为乌司他丁干预组(75只)，造模后30min腹腔注射100，000U/kg乌司他丁。另外，Ⅱ、Ⅲ组均留15只大鼠观察生存率。造模后分别于6、12、24、36和48h，各组随机取6只大鼠，动态观察肝组织病理形态，监测肝生化指标含量，免疫组织化学方法检测肝组织CD163蛋白和HO-1蛋白的表达，逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肝组织CD163 mRNA和HO-1 mRNA的表达。实验数据以均数±标准差(X±S)表示，采用SPSS13.0进行数据分析，P<0.05表示差异有统计学意义。 结果： 1、模型建立24h后，大鼠表现为极度虚弱，活动明显减少，食欲减退，精神萎靡、嗜睡、少数发生抽搐。血胆红素明显升高，转氨酶亦明显升高。肝病理学表现为肝组织结构破坏严重，出现弥漫性的大片坏死，细胞溶解，肝索解离，小叶结构紊乱，肝窦明显扩张并出血，小叶内及汇管区可见大量炎症反应细胞浸润，提示急性肝功能衰竭动物模型成功建立； 2、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组大鼠生存率分别为100％(6/6)、40％(6/15)、66.7％(10/15)，Ⅲ组生存率较Ⅰ、Ⅱ组明显提高(P<0.05)。生存曲线分析亦见模型组生存率比干预组低。 3、各组大鼠肝功能检查示，造模后6h，血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase，ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase，AST)以及总胆红素(total bilirubin，TBil)浓度均显著升高，以12～24h之间最为显著。模型组与干预组 ALT、AST于24h达峰，分别为8346.7±1363.1U/L，9766.7±1274.1U/L与4151.3±970.0U/L，4696.7±1476.9U/L，均较对照组24.0±2.0U/L，82.3±16.9U/L高(F值分别为55.684，55.501，均P<0.01)，但干预组显著低于模型组(P<0.01)；而TBil于36h达峰，模型组与干预组分别为93.0±8.9μmol/L和66.0±10.5μmol/L，较对照组5.3±0.6μmol/L高(F值为95.319，P<0.01)，干预组亦显著低于模型组(P<0.01)。 4、免疫组织化学结果表明，相邻切片CD163和HO-1的阳性表达部位大体一致，多位于肝窦内及汇管区，CD163只表达在巨噬细胞胞浆内，而HO-1除此之外，造模后在部分肝细胞胞浆中也有表达。与对照组相比，模型组CD163蛋白和HO-1蛋白表达增加(P<0.01)，而乌司他丁干预组上升更加明显(P<0.01)； 5、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)结果显示，对照组CD163 mRNA、HO-1 mRNA仅有少量表达，模型组6h已有升高(P<0.01)，至24h达高峰，随后逐渐下降，但与对照组比较，各时间点差异均有统计学意义(P<0.01)；干预组各时间点较模型组均增加，在36h达高峰(P<0.01)，随后下降； 6、CD163 mRNA与HO-1 mRNA变化趋势相同，用直线相关分析证明两者有显著的正相关性(r=0.830，P<0.01)。 结论： 1、腹腔联合注射800mg/kg体质量D-Gal和40μg/kg体质量LPS可以一次性成功建造急性肝功能衰竭大鼠模型，大鼠状态、死亡率、肝组织病理及血生化改变符合ALF； 2、乌司他丁可明显改善急性肝功能衰竭大鼠的生存率、肝生化、肝脏损伤，表明乌司他丁在急性肝功能衰竭中可能具有抗炎、细胞保护作用； 3、CD163/HO-1通路参与急性肝功能衰竭的病理生理过程，而乌司他丁有可能通过该通路对机体发挥重要的保护作用。

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综述 血红蛋白清道夫受体在人类疾病中的研究进展