大鼠肢体缺血-再灌注后肝组织量HO-1表达的变化

摘要

目的:探讨大鼠肢体缺血-再灌注后肝内诱导型血红素氧合酶(HO-1)表达的变化及意义.方法:SD大鼠随机分为正常(N),假手术(S),后肢单纯缺血( 1),后肢缺血-再灌注(I-R) 2 h、6 h、12 h、18 h、24 h,后肢I-R18 h+ZnPP(HO-1活性抑制剂锌原卟啉)各组.夹闭双侧股动脉根部 4 h,开放2-24 h,制备I及I-R各组模型,I-R18 h+ZnPP组,再灌注6 h、12 h时经股静脉注射 ZnPP(每次5 μmol/kg).反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测肝组织HO-1mRNA表达的变化, 以HO-1与β-actin(内参对照物)mRNA逆转录扩增产物电泳谱带的积分灰度值的比值,作为HO -1mRNA 的半定量结果;免疫组化染色法观察HO-1蛋白在肝内的生成与分布;应用ZnPP抑制HO-1活性后,光镜观察肝组织的病理学变化,比色法测定肝组织MDA含量及SOD活性的变化.结果:(1 )N组肝组织HO-1mRNA的相对表达量为0.104±0.006,S组为0.163±0.011,I组为1.2 85±0.083,均较N组显著升高,P＜0.01;肢体I-R后肝组织HO-1mRNA表达上调,I-R1 2 h至峰值,此后回降,I-R 2 h、6 h、12 h、18 h和24 h各组的表达量依次为1.833±0. 048、1.847±0.048、3.781±0.132、1.875±0.077和0.742±0.036,均较N、S组显著升高(P＜0.01), I-R 2 h、6 h、12 h和18 h各组与I组相比有显著差异,P＜0.01.(2)N、S和I组可见散在分布的 HO-1阳性肝细胞,I-R组大部分肝细胞呈HO-1阳性.(3)I-R18 h+ZnPP组肝组织病变较I-R18 h组加重,肝血管明显收缩,肝细胞严重水肿.(4)I-R18 h+ZnPP组与I-R18 h组相比,SOD 活性下降,MDA含量增高(P＜0.01).结论:肢体I-R后肝内HO-1表达上调,表达HO-1的主要是肝细胞,抑制HO-1活性使肝损伤加重,肝内脂质过氧化反应增强,表明HO-1的诱生具有抗氧化保护效应.