茶多酚对MPTP-PD小鼠模型神经保护作用机制的研究

摘要

目的:在帕金森病(Parkinson,PD)小鼠模型基础上,探讨茶多酚(TeaPolyphenols,TP)对1-甲基-4-苯基-1-2-3-6-四氢吡啶(1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)致小鼠PD模型的多巴胺神经元的保护作用及其作用机制,以期揭示茶多酚保护PD的作用途径,为茶多酚应用PD的临床提供更多的理论依据。
　　 方法:选择69只C57BL雄性小鼠(20-25g)(由上海实验动物中心提供)清洁级自由摄水和食物,12小时明暗环境适应一周后进行正式实验。C57BL/6小鼠69只随机分为8组,①生理水组(对照组)为生理盐水(NS)+生理盐水(NS),②茶多酚组(TP组)为NS+茶多酚(TP),其中TP组又分为TP1组(10mg/kg)、TP2组(30mg/kg)、TP3组(60mg/kg),③PD组(模型组)为Ns+MPTP,④茶多酚保护组(保护组)为TP+PD组,其中TP+PD组又分为TP+PD1组(10mg/kg)、TP+PD2组(30mg/kg)、TP+PD3组(60mg/kg)。在造模前对各组进行爬杆时间及游泳试验评分的测定。①NS组:腹腔注射生理盐水②TP组:腹腔注射不同剂量TP(TP1,TP2,TP3),首先每隔2小时,共3次,其后,每隔5小时注射,共2次③PD组:腹腔注射MPTP(20mg/kg),每隔2小时,共3次④TP+PD组:先注射TP(TP+PD1,TP+PD2,TP+PD3),半小时后注射MPTP,参照PD组完成MPTP的注射。TP的注射时间表参照TP组。造模72小时后测定各组小鼠爬杆时间及游泳试验评分。于造模7天后断头,取脑,中脑黑质多巴胺神经元的免疫组化测定,双侧纹状体的细胞因子IL-6、TNF-α因子的测定。
　　 结果:
　　 1.行为学的测定
　　 ①爬杆时间测定
　　 PD组造模后爬杆的时间与造模前比较明显延长(P<0.05)；TP+PD1组、TP+PD3组造模后与造模前比较爬杆时间明显延长(P<0.05)；而TP+PD2组造模后与造模前比较爬杆时间无明显变化；TP+PD1、TP+PD3组的爬杆时间较TP+PD2组明显延长(P<0.05)。
　　 ②游泳试验评分测定
　　 PD组造模后游泳试验评分与造模前比较明显降低,统计学上存在显著差异(P<0.05)；NS组、TP组造模前后游泳试验评分无明显差异,TP+PD1组、TP+PD2组、TP+PD3组造模后与造模前比较游泳试验评分均明显降低(P<0.05)；造模后PD组与NS组、TP组有明显差异(P<0.05),PD组较TP+PD1、TP+PD3组、TP+PD2组造模后游泳试验评分无明显差异(P>0.05)。TP+PD1、TP+PD3组与TP+PD2组比较无明显差异(P>0.05)。
　　 2.TH的免疫组化染色
　　 TH染色显示PD组较NS组黑质多巴胺神经元明显减少(P<0.05)；经TP预处理后的TP保护组多巴胺神经元数目明显增加,TP+PD1组、TP+PD2组、TP+PD3组与PD组比较神经元数目明显增多(P<0.05),TP+PD2组多巴胺神经元数目较TP十PD1、TP+PD3组明显增多(P<0.05)。NS组、TP组比较统计学无明显差异(P>0.05)。
　　 3.纹状体细胞因子的测定
　　 ①IL-6的测定
　　 与NS组、TP组相比,PD组小鼠纹状体内IL-6含量明显降低(P<0.05)。NS组与TP+PD组小鼠纹状体内IL-6含量无明显差异(P>0.05)；TP+PD1、TP+PD2和TP+PD3组小鼠纹状体内IL-6含量较PD组明显升高(P<0.05)；而TP+PD1、TP+PD2组与TP+PD3组相比差异有统计学意义(P<0.05)。TP+PD3组小鼠纹状体内IL-6含量较TP+PD1和TP+PD2组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。
　　 ②TNF-α的测定
　　 Ns组和TP+PD组小鼠纹状体内TNF-α含量与PD组比较,无显著差异(P>0.05),PD组小鼠纹状体内的TNF-α含量与TP+PD1、TP+PD2和TP+PD3组比较亦无显著性差异(P>0.05),TP+PD1、TP十PD2组纹状体区的TNF-α含量与TP+PD3组比较亦无显著性差异(P>0.05)。
　　 结论:
　　 1.通过腹腔注射MPTP成功复制PD小鼠模型。茶多酚能改善PD模型小鼠的行为学
　　 2.PD模型小鼠黑质多巴胺神经元数目较正常小鼠明显减少,经茶多酚干预的PD模型小鼠黑质多巴胺神经元数目明显增多。
　　 3.PD模型小鼠纹状体IL-6含量明显降低,茶多酚干预后小鼠纹状体的IL-6含量升高,且低、中剂量的茶多酚干预作用较高剂量明显:PD模型小鼠纹状体TNF-α含量经茶多酚干预后其结果无显著差异。