孟鲁司特对THP-1源泡沫细胞MMP-2和MMP-9表达的影响

摘要

目的：
　　 1．研究THP-1单核细胞在向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)，MMP-9基因和蛋白表达及其分泌的变化。
　　 2．探讨孟鲁司特对THP-1源泡沫细胞的形成及其对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)，MMP-9蛋白表达和分泌的影响。
　　 方法：
　　 1．人单核细胞系(THP-1)用160nmol/L佛波酯(Phogrbol12-myristate13-acetate，PMA)诱导24小时后分化成为巨噬细胞，继与50mg/L的氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)共同孵育48小时建立泡沫细胞模型。油红0染色后显微镜下观察细胞形态鉴定泡沫细胞的形成。并通过反转录-聚合酶链式扩增反应(RT-PCR)和Westernblot分别检测单核细胞向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中MMP-2和MMP-9mRNA和蛋白表达的变化，同时用Gelatinzymography检测细胞上清中MMP-2和MMP-9活性的变化。
　　 2．人单核细胞株(THP-1)用160nmol/LPMA诱导24小时后分化成为巨噬细胞后，先给予以不同浓度的孟鲁司特(0.1、0.01μmol/L)预处理4小时，再加入50mg/LOX-LDL共同孵育48小时。同时设阳性对照组（20μmol/L的MMP-2/9抑制剂）及空白对照组。油红0染色后显微镜下观察各处理组中泡沫细胞的形成，并通过Westernblot和Gelatinzymography分别检测不同处理组细胞内MMP-2和MMP-9蛋白的表达及细胞上清中MMP-2和MMP-9活性的表达。
　　 结果：
　　 1．油红O染色后显微镜下观察示巨噬细胞未被油红O染色，而加入50mg/LOX-LDL孵育48小时后可见大量细胞胞质被油红O染成红色，表明泡沫细胞建模成功。而孟鲁司特及MMP-2/9抑制剂预处理组细胞胞质染色明显浅于泡沫细胞组，表明孟鲁司特及MMP-2/9抑制剂能下调OX-LDL介导的泡沫细胞的形成。
　　 2．THP-1单核细胞向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中MMP-2mRNA表达量分别增加了1.03倍和2.45倍(P＞0.05，P＜0.01);MMP-9mRNA表达量分别增加了2.71倍和2.75倍(P＜0.05，P＜0.01)。巨噬细胞与泡沫细胞相比，MMP-2mRNA增加了2.40倍(P＜0.01);MMP-9mRNA水平均无明显差异(P＞0.05)。
　　 3．THP-1单核细胞向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中MMP-2蛋白的表达量分别增加了2.30倍和5.44倍(P＜0.01，P＜0.01);MMP-9蛋白的表达量分别增加了5.98倍和9.14倍（P＜0.01，P＜0.01）。巨噬细胞和泡沫细胞中的MMP-2和MMP-9蛋白的表达量分别增长了2.35倍和1.52倍(P＜0.01，P＜0.01)。
　　 4．THP-1细胞诱导成巨噬细胞后proMMP-9提高了约6.00倍(P＜0.05)，但是两组间proMMP-2却没有差异（P＜0.05）：进一步诱导成为泡沫细胞后，proMMP-9和proMMP-2相对THP-1细胞分别提高了7.37倍(P＜0.05)和2.44倍（P＜0.05）；相对于巨噬细胞分别提高了1.22倍(P＜0.05)和2.52倍(P＜0.05)．
　　 5．THP-1细胞基本不分泌活性MMP-2和MMP-9，当其诱导成为巨噬细胞后分泌明显增多(P＜0.01)，孵育成泡沫细胞后分泌量进一步升高，相对巨噬细胞表达分别增长了3.52倍(P＜0.01)和2.50倍(P＜0.01)。
　　 6．孟鲁司特(0.1、0.01μmol/L)能显著下调THP-1源泡沫细胞内MMP-2和MMP-9蛋白的表达(P＜0.05，P＜0.05)，不同浓度药物干预组间有浓度依赖趋势但组间的差异没有显著性(P＞0.05)。同时下调OX-LDL诱导的泡沫细胞上清中活性MMP-2和MMP-9的分泌(P＜0.01，P＜0.01)，不同浓度的药物干预组间有浓度依赖趋势但组间的差异没有显著性(P＞0.05)。
　　 结论：
　　 1．THP-1细胞经佛波酯和OX-LDL诱导后，能成功建立THP-1源性泡沫细胞模型。
　　 2．THP-1细胞向巨噬、泡沫细胞分化过程中细胞内MMP-2和MMP-9mRNA和蛋白的表达及细胞上清中活性MMP-2和MMP-9的表达均逐步增加。
　　 3．孟鲁司特可抑制OX-LDL介导的泡沫细胞的形成，并显著下调泡沫细胞中MMP-2和MMP-9蛋白的表达及细胞上清中活性MMP-2和MMP-9的表达。为防治动脉粥样硬化及抗动脉粥样硬化新药的筛选提供新的理论依据。