台州地区耳聋患者12S rRNA和GJB2基因变异的频谱绘制及遗传学分析

摘要

目的：
　　 1.绘制浙江省台州地区非综合征型耳聋患者线粒体12S rRNA和GJB2基因变异频谱，完善台州地区耳聋患者致病基因和变异位点的数据库。
　　 2.进一步阐明携带线粒体12S rRNAA1555G的耳聋患者可能的高外显率的发病机制。
　　 3.探讨GJB2基因各变异类型特点及其对应耳聋表型特点，提供GJB2基因变异分子诊断方法，为GJB2基因诊断提供依据。
　　 4.初步制定线粒体12S rRNA和GJB2基因耳聋遗传咨询程序、内容和方式。
　　 方法：
　　 1.收集台州地区助听器配置耳聋患者、温岭市聋哑学校患儿和温岭市第一人民医院耳鼻喉科门诊非综合征型耳聋患者共173例血样，并采集患者临床资料，进行统一整理。
　　 2.提取173例耳聋患者的血样基因组DNA，进行线粒体12S rRNA和GJB2基因聚合酶链反应(polymerise chain reaction，PCR)扩增，产物纯化后测序。使用生物软件如DNAStar和Chromas2.0等将测序结果与线粒体和GJB2的标准参考序列进行比对分析，查找线粒体基因组和GJB2变异位点，统计这两个基因患者的变异位点和样本数目，并绘制台州地区耳聋患者这两个基因的变异频谱。
　　 3.将筛查到的携带线粒体12S rRNAA1555G变异的耳聋患者进行线粒体基因组的扩增和测序，根据测序结果分析线粒体单体型，结合临床资料进一步分析单体型对耳聋表型表达的影响，以及是否存在其他线粒体上的继发突变对耳聋表型表达的影响。
　　 4.分析台州地区耳聋患者GJB2基因耳聋相关致病性变异位点的类型特点及其对应耳聋表型表达特点。
　　 5.对筛查到的携带线粒体12S rRNA和GJB2基因上耳聋相关变异位点的耳聋患者进行遗传学分析，包括遗传方式及遗传规律等，并进一步总结及初步制定遗传咨询的程序和内容。
　　 结果：
　　 1.成功收集浙江省台州地区助听器配置耳聋患者、温岭市聋哑学校患儿和温岭市第一人民医院耳鼻喉科门诊耳聋患者共173例血样。
　　 2.成功绘制台州地区耳聋患者线粒体12S rRNA和GJB2基因上变异频谱。
　　 3.173例台州地区的非综合征型耳聋患者中携带线粒体12S rRNAA1555G变异患者有6例，占耳聋患者的3.47％。结合线粒体全基因组的测序结果这6例患者的分别是线粒体东亚单体型A4、B4a2、B5b1、D4b2b2、F1a和F3a，另外，发现有2例患者除携带A1555G变异外分别携带线粒体tRNAThr上的T15943C和A15924G变异。
　　 4.173例台州地区的耳聋患GJB2基因上发现GJB2基因序列改变达到73.41％;其中致病变异耳聋相关患者43例，占耳聋患者的24.86％，最常见的235delC变异率达到21.97％。
　　 5.分析线粒体12S rRNA和GJB2基因耳聋相关的致病变异位点遗传特征，并初步制定属于本实验室和Attardi线粒体生物医学研究院的主要以这两个基因为主的耳聋遗传咨询程序、内容和方式。
　　 结论：
　　 1.发现6例携带线粒体12S rRNAA1555G变异患者，占173例台州地区耳聋患者的3.47％。线粒体单体型对A1555G变异患者的耳聋表型表达可能影响不大。线粒体tRNAThr上的T15943C和A15924G变异可能是影响线粒体A1555G变异耳聋患者表型表达的新的继发突变位点。
　　 2.台州地区非综合征型耳聋患者GJB2基因变异占73.41％，致病变异位点也相当较高，达24.86％。因此，GJB2基因变异可能为台州地区主要的致病变异之一。
　　 3.完成线粒体12S rRNA和GJB2基因耳聋相关的致病变异位点遗传特征分析，并初步制定属于本实验室和Attardi线粒体生物医学研究院的主要以这两个基因为主的耳聋遗传咨询程序、内容和方式。这些工作为耳聋患者的早期诊断、早期干预及详尽的遗传咨询提供了理论依据和技术支持。

目录

中英文缩略词对照表

摘要

前言

第一部分 台州地区非综合征型耳聋患者线粒体12S rRNA变异频谱绘制和6个线粒体12S rRNA A1555变异耳聋家系的研究分析

材料与方法

结果

分析和讨论

小结

第二部分 台州地区非综合征型耳聋患者GJB2基因变异筛查和频谱绘制

材料与方法

结果

分析和讨论

小结

第三部分 台州地区非综合征型患者线粒体12S rRNA和GJB2基因变异的遗传分析和咨询

材料与方法

结果

分析和讨论

小结

参考文献

附录1 耳聋基因检测知情同意书

附录2 耳聋患者信息登记

附录3

附录4 浙江省医学遗传学重点实验室Attardi线粒体生物医学研究院基因检测报告单

附录5 在校期间发表文章

致谢

文献综述 纤毛束功能的分子机制：遗传性耳聋小鼠模型研究

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