大鼠骨髓间充质干细胞来源的血管内皮细胞贴附ePTFE的实验研究

摘要

目的： 应用大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)来源的血管内皮细胞贴附ePTFE血管壁，并加入肝素共同培养，观察其对细胞贴附效率的影响，探讨提高细胞贴附ePTFE的方法。 方法： 1.MSCs分离和诱导分化培养：在无菌条件下，取SD大鼠长骨骨髓，经密度梯度离心法获取形态均一的梭形细胞；加入10ng/ml内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)和2ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblast growth facotr，bFGF)共同培养。 2.诱导细胞的鉴定：取传代后第二代实验组和对照组的两组细胞，进行免疫组织荧光染色，观察Ⅷ因子相关抗原(von Willebrand factor,vWF)的表达情况，及应用透射电镜观察细胞分化后细胞浆W-P小体的超微结构。 3.细胞贴壁和贴壁率的测定：将诱导的血管内皮细胞分成4组，种植于膨体聚四氟乙烯(ePTFE)人工血管上并分别加入浓度为0.10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml的肝素培养，每4h检测内皮细胞贴附率，绘制细胞贴壁曲线。 4.统计学分析：实验数据以χ±s表示，采用SPSS13.0软件方差齐性检验和单因素方差分析法进行统计学检测。 结果： 1.经密度梯度离心法获取的MSCs漩涡状生长，形态呈梭形；诱导后细胞的vWF免疫组织荧光染色呈阳性表达，胞浆呈黄绿色，细胞轮廓清晰；电镜下可见血管内皮细胞特征性的W-P小体。 2.诱导的血管内皮细胞在ePTFE的贴附率逐渐升高，于20h时间点达到最高，4组贴比率分别是88.34％、96.48％、91.98％、85.69％。 3.肝素能显著提高血管内皮细胞在ePTFE贴壁率，浓度为20ug/ml肝素的效果最高。 结论： 1.大鼠MSCs具有向血管内皮细胞分化的能力，能够为血管内皮化及组织工程提供理想的种子细胞。 2.肝素对MSCs来源的血管内皮细胞有重要的影响，具有能够有效地提高血管内皮化效率的作用，为人工血管的进一步发展提供了新的思路。

目录

论文说明:中英文缩略表

声明

前言

材料与方法

3结果

4讨论

5结论

参考文献

附录

致谢

综述:体外诱导骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化的研究