新生大鼠胆红素脑病神经递质变化的HR1HMRS和病理学研究

摘要

目的:
　　 本论文主要应用高分辨核磁共振波谱研究新生大鼠在胆红素脑病不同时期海马和小脑内神经递质的变化，并结合病理学改变，阐明新生大鼠胆红素脑病的发病机制。
　　 方法:
　　 将32只足月产9日龄健康新生SD大鼠随机分为实验组（TG组）和对照组(CG组)，16只/组，经颈静脉插管给药，TG组鼠注射胆红素溶液，CG组注射安慰剂，注射剂量均为50mg/kg体重（17μml/g体重）。TG组、CG组分别在4h和幼年期（分别记作T1G、T2G和C1G、C2G）断头处死，并采全血测血清胆红素浓度，8只/时期。每组随机取5只分离双侧海马、双侧小脑半球，经速冻、匀浆后做HR1HMRS研究，分析其脑内神经递质变化，余下3只取全脑并切取海马、小脑半球层面切片做HE染色、Tunel染色，观察神经细胞形态学改变和损伤凋亡情况，运用免疫组化方法检测T2G组小鼠海马和小脑内GFAP表达情况。综合分析各组间不同时期血清胆红素浓度，脑组织胆红素浓度，不同脑区细胞损伤情况及神经递质含量变化信息，从代谢组学角度阐明新生儿胆红素脑病的发病机制。
　　 结果:
　　 1.实验鼠血清、脑组织胆红素浓度变化注射胆红素溶液0.5h后，血清胆红素高达531.54±27.58μmol/l，显著高于阈值浓度342μmol/l;T1G组血清胆红素浓度较CG组增加了62.35倍(P＜0.01); T1G组小鼠脑内可检测出胆红素（P＜0.05）。
　　 2.各脑区神经元损伤或凋亡比较T1G组海马、小脑内阳性细胞较CG组增多，T2G组海马、小脑内阳性细胞均多于CG组（p均＜0.05）;T2G组海马内的阳性细胞较T1G组明显增多(p＜0.05);T2G组小脑内的阳性细胞较T1G组减少(p＜0.05);T1G组海马内的阳性细胞较小脑多(p＜0.05)，T2G组海马内阳性细胞明显较小脑多(p＜0.05)。
　　 3.幼年期鼠各脑区星形胶质细胞GFAP表达比较与C2G组相比，T2G组海马、小脑内GFAP蛋白表达数量增多(p＜0.05);海马星形胶质细胞内GFAP蛋白表达较小脑多(p＜0.05)。
　　 4.实验鼠各脑区的代谢物含量变化:
　　 ①神经递质相关的氨基酸浓度变化:T1G组海马中的GABA水平较C1G组显著升高，小脑的Gln水平较C1G组下降，差异具有统计学意义(P＜0.05);T2G组海马内GABA、Glu、Gln浓度均显著升高，小脑内的GABA浓度升高，差异具有统计学意义（P均＜0.05）。
　　 ②NAA和Cho: T1G组海马内NAA水平降低，较C1G组差异有统计学意义(P＜0.05)，小脑内Cho浓度下降有统计学意义(P＜0.05);T2G组海马和小脑内的Cho升高，与C2G组比较，差异有统计学差异(P＜0.05)③Cr、Suc、Ala、my-Ins、Tau、Gly等其他重要代谢物变化。()T1G组海马和小脑的Lac、Gly浓度升高，海马中Suc、小脑中Suc、Tau浓度下降，与C1G组比较差异有统计学意义（P均＜0.05）;T2G组海马的Ala、Suc、Cr、Tau及Gly，小脑的Tau浓度升高，与C2G组比较差异有统计学意义（P均＜0.05）。
　　 结论:
　　 1.经颈静脉插管注射高浓度胆红素溶液的方法可成功制作出新生大鼠胆红素脑病动物模型。
　　 2.HR1HMRS代谢组学研究表明新生大鼠胆红素脑病引起的海马和小脑神经元损伤与该区域的神经递质代谢紊乱有关。
　　 3.胆红素神经毒性介导的神经元损伤存在区域性差异，海马比小脑易感性高;幼年期海马存在持续性损伤，表明神经元自我修复机制破坏，可能与该区域持续的神经递质代谢异常相关。

目录

中英文缩略词表

摘要

前言

材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验方法

结果

3．1 BE新生SD大鼠动物模型鉴定

3．2 神经元损伤或凋亡

3．3 幼年期实验鼠海马和小脑内GFAP蛋白表达情况

3．4 各组BE新生鼠海马、小脑组织的1H NMR谱

3．5 BE新生大鼠海马、小脑的代谢模式分析及代谢物含量变化

分析与讨论

全文总结

参考文献

图片

附录

致谢

综述 新生儿胆红素脑病的研究概况

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