miR-375-3p调控Rasd1基因在缺氧缺血性脑损伤后昼夜节律紊乱中的初步研究

摘要

目的：
　　建立体外新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（Hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）模型，观察大鼠HIBD后松果体内微 RNA-375-3p（microRNA-375-3p，miR-375-3p）、地塞米松诱导的Ras相关蛋白1（dexamethasone-induced Ras-related protein1，Rasd1）、隐花色素1（Cryptochrome1，Cry1）的表达变化，通过荧光素酶报告基因实验证实Rasd1是miR-375-3p的靶基因，初步探讨miR-375-3p调控Rasd1在HIBD后昼夜节律紊乱中的作用。
　　方法：
　　采用7日龄的SD（Sprague-Dawley）大鼠，按随机原则，分假手术组（Sham组）和缺氧缺血组（HIBD组），根据Rice-Vannucci改良法，制作体外大鼠HIBD模型。利用实时荧光定量PCR（Real-time quantitativePCR，RT-qPCR）法测定两组在HIBD后0 h、8 h、16 h、24 h、32 h、40 h、48 h七个时间点松果体内miR-375-3p、Rasd1、Cry1的表达变化；利用荧光素酶报告基因实验验证miR-375-3p的靶基因是Rasd1。
　　结果：
　　1、在HIBD模型建立后，HIBD组miR-375-3p的表达水平在8 h高于相应观察点的Sham组（P＜0.05），在24 h、32 h、40 h、48 h低于相应观察点的Sham组（P＜0.05），而HIBD组miR-375-3p的表达水平在0 h、16 h与相应观察点Sham组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；在HIBD后miR-375-3p的表达在16 h达到高峰，24 h起降低，持续至48 h。
　　2、在HIBD模型建立后，HIBD组Rasd1的表达水平在8 h、16 h、48 h低于相应观察点的Sham组（P＜0.05），在0 h、24 h、32 h、40 h高于相应观察点的Sham组（P＜0.05）；在HIBD后Rasd1 mRNA的表达在24 h明显上升，32 h起降低，48 h达最低。
　　3、HIBD后早期，在松果体内8 h和16 h miR-375-3p表达上调，Rasd1基因表达下调；24小时起miR-375-3p表达明显下调，Rasd1基因表达上调。
　　4、在HIBD模型建立后，HIBD组Cry1的表达水平在16 h、24 h高于相应观察点的Sham组（P＜0.05），在32 h、40 h低于相应观察点的Sham组（P＜0.05），而HIBD组Cry1的表达水平在0 h、8 h、48 h与相应观察点Sham组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；在HIBD后Cryl mRNA的表达在16 h开始上升，24 h达到顶峰，32 h起降低，持续至48 h。
　　5、HIBD后，Cry1与Rasd1在松果体中的mRNA水平均呈现先升高后降低的趋势，在24 h达到高峰，32 h开始降低。
　　6、荧光素酶报告基因实验验证Rasd1是miR-375-3p的靶基因。
　　结论：
　　1、HIBD后早期，在松果体内miR-375-3p表达上调，Rasd1基因表达下调；中晚期miR-375-3p表达明显下调，Rasd1基因表达上调。
　　2、HIBD后，Cry1与Rasd1在松果体中mRNA水平均呈现先升高后降低的趋势，提示Rasd1可能参与HIBD后昼夜节律紊乱的病理生理过程。
　　3、Rasd1是miR-375-3p的靶基因之一。

目录

声明

引言

一、新生儿缺氧缺血性脑病研究现况

二、昼夜节律中松果体及褪黑素的生物学作用

三、小RNA

四、生物昼夜节律的分子学机制

第一部分 miR-375-3p、Rasd1及Cry1在HIBD新生大鼠松果体中的表达变化

材料与方法

研究结果

讨论

第二部分 miR-375-3p靶基因Rasd1的验证

材料与方法

研究结果

讨论

结论

参考文献

综述:生物标志物在新生儿缺氧缺血性脑病中的研究进展

英汉缩略语名词对照

研究生期间发表及待发表文章

致谢