保肝药物活性筛选方法的建立及应用

摘要

目的：
　　 (1)建立一种稳定便捷的保肝药物活性筛选方法，寻找獐牙菜苦苷热转化产物保肝作用的活性部位，以期明确青叶胆抗肝炎功效的物质基础。(2)建立作用机理不同的5种化学性肝损伤模型，观察傣医解药“雅解沙把”的保肝作用，初步探索其作用机理，为其临床用于防治肝损伤提供实验依据。
　　 方法：
　　 (1)用CC14复制小鼠急性肝损伤模型，考察CCl4染毒剂量、染毒时间及染毒途径对实验结果的影响，选择阳性对照药物，多次重复实验来考察方法的稳定性。
　　 (2)用CCl4小鼠急性肝损伤模型，通过药理筛选与化学分离紧密结合的追踪性研究方法，寻找獐牙菜苦苷热转化产物保肝作用的活性部位。
　　 (3)用CCl4、D-GLaN、AAP、TAA、ANIT复制5种作用机理不同的化学性肝损伤模型，对傣医解药“雅解沙把”保肝作用的有效性进行验证，并初步探讨其作用机理。
　　 结果：
　　 (1)对小鼠一次性腹腔注射0.2％CCl4橄榄油溶液0.1ml/10g.bw，染毒20h后，模型组小鼠血清ALT、AST均高于正常组(P＜0.01)，可成功复制急性CCl4肝损伤模型；联苯双酯组小鼠血清ALT低于模型组(P＜0.01)，提示其有保肝降酶作用，故选择联苯双酯作为阳性对照药；经多次方法学考察，确定已建立了稳定的保肝药物活性筛选实验方法。
　　 (2)初步筛选结果显示獐牙菜苦苷热转化产物水溶部分1200mg/kg组小鼠血清ALT低于模型组(P＜0.01)；獐牙菜苦苷热转化产物沉淀部分1200mg/kg及400mg/kg组ALT低于模型组(P＜0.05、P＜0.01)。经多次重复实验发现，与模型组相比，獐牙菜苦苷热转化产物水溶部分及沉淀部分400mg/kg组小鼠血清ALT、AST低于模型组(P＜0.01、P＜0.05)；沉淀部分200mg/kg、100mg/kg组小鼠血清ALT、AST均可低于模型组(P＜0.05)。追踪筛选实验显示从沉淀部分分离出的样品A组小鼠血清ALT低于模型组(P＜0.05)。
　　 (3)分别对小鼠一次性腹腔注射800mg/kgD-Galn溶液24h后，一次性灌胃给予小鼠500mg/kgAAP溶液24h后，对小鼠一次性腹腔注射100mg/kgTAA溶液16h后，模型组小鼠血清ALT及AST均可高于正常组(P＜0.01)；一次性灌胃给予小鼠100mg/kgANIT溶液48h后，模型组小鼠血清ALT、Tbil均高于正常组(P＜0.01)。提示上述实验方法均可成功复制急性肝损伤模型。
　　 (4)“雅解沙把”高剂量组小鼠血清ALT低于CCl4致肝损伤模型组(P＜0.01)，低剂量组有作用趋势(P＞0.05)。“雅解沙把”高剂量组小鼠血清ALT低于D-Galn致肝损伤模型组(P＜0.05)，而对抑制AST的升高仅有作用趋势(P＞0.05)。“雅解沙把”高剂量组小鼠血清ALT低于AAP致肝损伤模型组(P＜0.05)，而对抑制AST的升高仅有作用趋势(P＞0.05)。“雅解沙把”高剂量组对降低TAA致小鼠血清ALT的升高仅有作用趋势(P＞0.05)。“雅解沙把”高剂量组小鼠血清ALT低于ANIT致肝损伤模型组(P＜0.05)。提示“雅解沙把”对以上5种作用机理不同的的化学性肝损伤均具有一定的保肝降酶作用。
　　 结论：
　　 (1)对小鼠一次性腹腔注射0.2％CCl4橄榄油溶液0.1ml/10g.bw，染毒20h，可以成功复制结果稳定的小鼠CCl4急性肝损伤模型。
　　 (2)獐牙菜苦苷热转化物水溶部分及沉淀部分对CCl4所致急性肝损伤小鼠血清ALT、AST的升高均有一定的降低作用；由沉淀部分分离出的样品A组对CCl4所致急性肝损伤小鼠血清ALT的升高亦有一定的降低作用；提示獐牙菜苦苷热转化物水溶部分、沉淀部分及沉淀部分分离出的样品A具有一定的保肝降酶作用。
　　 (3)分别给予小鼠0.2％CCl40.1ml/10g.bw、800mg/kgD-Galn、500mg/kgAAP、100mg/kgTAA、100mg/kgANIT肝毒剂，均可成功复制作用机理不同的小鼠急性肝损伤模型。
　　 (4)“雅解沙把”对CCl4、TAA、D-GLaN、AAP、ANIT所致急性肝损伤小鼠血清ALT、AST的升高均有一定的降低作用或作用趋势，提示“雅解沙把”对以上5种化学性肝损伤均具有一定的保肝降酶作用。作用机制可能与“雅解沙把”具有抑制脂质过氧化、增加机体清除自由基能力等有关。