Bmi-1和Mel-18基因在MG-132诱导的人HL-60细胞系凋亡中的表达变化

摘要

目的：Bmi-1和Mel-18都属于Polycombgroup(Pc-G)基因家族的成员，该基因家族在机体形成，造血和控制细胞周期上发挥关键的作用。Bmi-1作为一种癌基因，其表达不仅为正常造血干细胞(HSC)自我更新所必需，也决定着HSC和白血病干细胞(LSC)的增生能力。而Mel-18作为一种可能的抑癌基因，在动物实验中能负调控HSC的自我更新能力，并可影响HSC的细胞周期状态。NF-κB于原代白血病细胞中组成性激活，抑制其活性能诱导明显凋亡的发生。目前在人淋巴瘤的研究中发现Bmi-1和Mel-18均与NF-κB有明显的统计学联系；而小鼠中Mel-18的启动子上游存在NF-κB的潜在结合位点。MG-132为一种蛋白酶体(Proteasome)抑制剂，能够选择性抑制NF-κB活性，从而诱导白血病细胞的凋亡。本实验主要研究Bmi-1和Mel-18在人急性髓系白血病细胞株HL-60凋亡过程中的表达变化，探讨其与细胞凋亡的关系。 方法：将HL-60细胞与一定浓度MG-132进行联合培养后，按6h，9h，12h时间点提取样本和对照组进行Real-TimeRT-PCR检测Bmi-1和Mel-18基因的表达水平，同时用流式细胞仪检测细胞凋亡状况；另于培养后12h用NF-κB抗体处理样本，于共聚焦显微镜下确认NF-κB受抑制情况，同时进行初步的细胞周期流式检测。 结果：处理前Mel-18表达位于较低水平，而Bmi-1水平较高，处理后Mel-18表达水平随时间逐渐明显上调，而Bmi-1水平未见明显变化，同时细胞凋亡比例也逐渐增加，处理12h后较多细胞其周期停滞在G2/M期。 结论：MG-132抑制NF-κB活性的过程中很可能通过上调Mel-18的表达，使较多的细胞停滞在G2/M期，从而诱导了HL-60细胞凋亡。这提示Mel-18很可能为NF-κB的下游作用途径之一，其表达水平与白血病细胞的凋亡有着密切关系。

目录

前 言

1.材料与方法

2.实验结果

3.讨 论

参考文献

人白血病干细胞研究进展

致 谢

附图