选择性COX-2抑制剂Nimesulide对人肝癌细胞系HepG2 MDR1基因表达的调节

摘要

引言 原发性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)在常见的恶性肿瘤中列第五位，其发病率和死亡率在逐年增加。在中国大陆包括香港、台湾地区，80％～90％的HCC病人合并慢性病毒性肝炎(包括乙型和丙型)及肝硬化，说明“慢性肝炎-肝硬化-肝癌”之间存在密切的临床与病理联系。近年来，以外科手术切除为主的多学科综合治疗，使得其临床效果有了长足的进步和较大的提高，但有效的早期诊断手段的缺乏和手术后的转移、复发令其长期生存率远未令人满意。究其原因，主要是HCC的发生机制不明，而且大多数病人就诊时已属中晚期。因而，寻求新的方法对高危人群进行早期干预，包括化学预防，以加强手术后病人复发、转移的监护和综合治疗，可能有助于改变目前HCC临床诊疗的局面。 流行病学调查和动物实验证实，长期、规律、小剂量的服用阿司匹林或其它非甾体类抗炎药物(non-steroidalanti-inflammatorydrugs，NSAIDs)能有效降低结肠癌的发病率和死亡率，而NSAIDs的抑制靶点主要是环氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)。NSAIDs通过抑制COX-2的活性阻断前列腺素的合成，后者可促进细胞增殖、诱导细胞癌变。大量研究表明，COX-2在结肠癌、胃癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌、肺癌、胰腺癌等组织均呈过高表达。HCC多系在“慢性炎症-肝再生”的基础上发生基因突变导致细胞恶性转化而成，由此我们可以设想，如果COX-2在“慢性肝炎-肝硬化-肝癌”这一病理过程中起着某种作用，则选择性COX-2抑制剂有望用于HCC的预防和治疗。 目前，化疗仍然是治疗恶性肿瘤的重要手段之一，而影响肿瘤化疗的最大障碍是肿瘤细胞多药耐药性(multi-drugresistance，MDR)。 利用免疫组化和特异性核酸探针，发现几乎所有的肿瘤类型中，包括癌，肉瘤，白血病，淋巴瘤等，均有多药耐药基因MDR1的表达，许多研究表明MDR1与病人治疗结果密切相关，MDR1高表达病人生存期短，缓解率低，复发率高。晚近有研究显示，在某些肿瘤组织中COX-2与MDR1/P-gp表达呈明显正相关性。基于此，我们研究选择性COX-2抑制剂用于HCC预防和治疗的可能性。 第一部分：原发性肝细胞癌组织中COX-2和MDR1表达的相关性 目的：探讨原发性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)组织中环氧合酶-2蛋白(cyclooxygenase-2,COX-2)与P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的关系。 方法：应用免疫组织化学方法检测42例HCC组织中COX-2蛋白与P-gp蛋白的表达，应用RT-PCR方法同时检测COX-2基因与MDR1基因mRNA的表达。 结果：1、在免疫组织化学检测中，COX-2蛋白在HCC组织中表达明显升高，HCC组织中P-gp蛋白阳性表达亦明显升高。COX-2阳性组中P-gp表达阳性率为82.8％(24/29)，而COX-2阴性组P-gp同时阴性率61.2％(8/13)，两者有高度正相关性，相关系数r=0.74，P＜0.05。2、RT-PCR显示两种基因的mRNA表达与蛋白表达具有高度的一致性。 结论：COX-2蛋白的表达可能参与了HCC的发生及恶性进展，并可能干预P-gp表达，参与对肿瘤的多药耐药(MDR)的调节作用。 第二部分：Nimesulide对人肝癌细胞系HepG2MDR1基因表达的调节 目的：探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂Nimesulide对HepG2细胞MDR1基因表达产物P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)表达的影响。 方法：HepG2细胞经浓度分别为0、10、100μmol/L的Nimesulide处理后，免疫组化检测Nimesulide对HepG2细胞前列腺素E2(PGE2)表达的影响，24、48h后用RT-PCR检测多药耐药(MDR1)mRNA表达，48h后用免疫细胞化学染色法检测P-gp表达。 结果：Nimesulide可显著抑制HepG2细胞PGE2的表达，并呈剂量依赖性(P＜0.05)。不同浓度Nimesulide作用于细胞后，HepG2细胞的MDR1/P-gp表达受不同程度抑制，100μmol/L的Nimesulide对MDR1mRNA表达抑制作用强于10μmol/L(P＜0.01)。不同浓度药物与测量时间为交互作用，作用48h与24h相比，Nimesulide对MDR1mRNA表达的抑制作用更强(P＜0.01)。 结论：Nimesulide可抑制HepG2细胞的MDR1/P-gp表达，且呈剂量效应关系。Nimesulide可能通过抑制COX-2活性。抑制COX-2下游产物PGE2表达，从而抑制P-gp表达。选择性COX-2抑制剂可能有助于减轻肿瘤细胞对化疗药物的耐药性并增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。

目录

第一部分肝细胞癌组织中COX-2和MDR1表达的相关性摘要

第一部分肝细胞癌组织中COX-2和MDR1表达的相关性英文摘要

第一部分肝细胞癌组织中COX-2和MDR1表达的相关性引言

第一部分肝细胞癌组织中COX-2和MDR1表达的相关性材料与方法

第一部分肝细胞癌组织中COX-2和MDR1表达的相关性结果

第一部分肝细胞癌组织中COX-2和MDR1表达的相关性讨论

第一部分肝细胞癌组织中COX-2和MDR1表达的相关性参考文献

第二部分Nimesulide对人肝癌细胞系HepG2 MDR1基因表达的调节摘要

第二部分Nimesulide对人肝癌细胞系HepG2 MDR1基因表达的调节英文摘要

第二部分Nimesulide对人肝癌细胞系HepG2 MDR1基因表达的调节引言

第二部分Nimesulide对人肝癌细胞系HepG2 MDR1基因表达的调节材料与方法

第二部分Nimesulide对人肝癌细胞系HepG2 MDR1基因表达的调节结果

第二部分Nimesulide对人肝癌细胞系HepG2 MDR1基因表达的调节讨论

第二部分Nimesulide对人肝癌细胞系HepG2 MDR1基因表达的调节参考文献

综述一环氧合酶-2在肝癌中的作用及机制的研究进展

综述二环氧合酶-2抑制剂与肿瘤的化学预防

致 谢