降浊颗粒含药血清对体外小鼠成纤维细胞增殖的影响

摘要

目的:本课题采用血清药理学方法，给予家兔降浊颗粒灌胃后获取含药血清，将采集的降浊颗粒含药血清作用于体外小鼠成纤维细胞。通过对小鼠成纤维细胞形态学观察和细胞增殖水平检测，进一步对肾脏纤维化机制进行研究。 方法:选健康雄性正常家兔12只，随机分成四组（3只/组），正常喂养一周后分别按实验设计要求予降浊颗粒剂灌胃。灌胃给药7天，每天两次。①正常组，给予生理盐水灌胃，10ml/L·d;②低剂量组，降浊颗粒有效剂量为2.1g/(kg·d);③中剂量组，降浊颗粒有效剂量为4.2g/(kg·d);④高剂量组降浊颗粒有效剂量为8.4g/(kg·d)。连续灌胃7天后颈动脉插管采集血液，离心制备含药血清，血清经0.22um滤膜滤过后，冻存于-80℃低温冰箱。收集对数期小鼠成纤维细胞，调整细胞密度，接种于96孔板，细胞实验设置对照组，按实验加入低、中、高各浓度组含药血清，对照组加完全培养基，每个浓度组设5个平行孔。培养过程中光镜观察小鼠成纤维细胞形态，并分别在12h、24h、48h、72h时间点，采用MTT法检测成纤维细胞。计算各组OD值、时间的抑制率(IR)。 结果:降浊颗粒各组含药血清作用于小鼠成纤维细胞后，与对照组在12h、24h、48h、72h点相比，将浊颗粒各组OD值均小于对照组，经统计学处理，差异有统计学意义(P＜0.05);降浊颗粒含药血清对细胞活力影响的检测结果，经各组降浊颗粒含药血清处理小鼠成纤维细在12h、24h内细胞活力抑制明显，低剂量组48小时后抑制效果减弱;中、高剂量组抑制率在12h、24h后抑制效果减弱，细胞抑制率下降，说明降浊颗粒含药血清对细胞的活力抑制率随时间的延长而减弱，经统计学处理，差异有统计学意义(P＜0.05);各组降浊颗粒含药血清对小鼠成纤维细胞在同一时间下相比较，对小鼠成纤维细胞抑制率随降浊颗粒含药血清浓度增加而升高，经统计学处理，差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论:降浊颗粒含药血清各组均可抑制小鼠成纤维细胞增殖，且各组抑制率在12-24小时内最为明显;在同一浓度下，降浊颗粒含药血清对体外小鼠成纤维细胞抑制率随时间的延长而减弱，同一时间下，对体外小鼠成纤维细胞抑制率随降浊颗粒含药血清浓度增加而升高，说明降浊颗粒含药血清对小鼠成纤维细胞活力的抑制作用呈剂量和时间依赖性。

目录

声明

摘要

英文缩略语表

引言

实验研究

一、实验材料

二、实验方法

三、统计学处理

四、实验结果

讨论

一、中医对慢性肾衰竭的认识

二、西医对慢性肾衰竭认识

三、降浊颗粒组方分析

四、含药血清药理学

五、不足与展望

结论

参考文献

成纤维细胞在肾脏纤维化过程中的研究进展

附录(部分实验图片)

致谢