芩丹胶囊对高血压大鼠血管外膜ADM及TGF-β1/Smad信号转导通路的影响

摘要

目的：
　　 1.观察芩丹胶囊(QD)对SHR大鼠血压的作用。
　　 2.观察QD对胸主动脉外膜ADM，TGF-β1，Smad7和Ⅰ、Ⅲ胶原的作用，探讨QD改善和逆转高血压血管外膜重构的作用机制。
　　 方法：
　　 1.研究对象:40周龄雄性SHR大鼠32只随机分为模型组（SHR组）、QD大剂量组（SHR+QDH组）、QD小剂量组（SHR+QDL组）和氯沙坦组(SHR+Los组);40周龄Wistar-Kyoto大鼠(WKY)16只随机分为空白对照组（WKY组）及正常用药组（WKY+QDH组）;每组8只。SHR+QDH组和WKY+QDH组分别给予QD750mg/(kg·d)，SHR+QDL组给予QD150mg/(kg·d)，SHR+Los组给予氯沙坦30mg/(kg·d)，SHR组和WKY组均给予等剂量的生理盐水。各组大鼠均采用灌胃给药，每日1次，连续给药12周。末次给药后，各组大鼠均须禁食24小时，不禁水。腹腔注射10％的水合氯醛麻醉后进行后续实验。
　　 2.研究内容:(1)测定各组大鼠尾动脉收缩压。(2)免疫组化法观察ADM，TGF-β1和Smad7在胸主动脉外膜的蛋白表达;(3)苦味酸-天狼星红染色，偏振光显微镜下观察Ⅰ、Ⅲ胶原在胸主动脉外膜的表达;(4)间接免疫荧光染色配合激光共聚焦显微镜扫描，对胸主动脉外膜Ⅰ、Ⅲ胶原的表达进行荧光定量分析。
　　 结果：
　　 1.治疗前后各组大鼠的收缩压比较
　　 用药前，与WKY大鼠相比，SHR大鼠血压显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05)。从给药第4周起，与SHR组比较，SHR+QDH组、SHR+QDL组、SHR+Los组大鼠的血压均有所下降，差异有统计学意义（P＜0.05)。给药第7周后，与SHR+QDL组比较，SHR+QDH组血压下降更为明显，差异有统计学意义(P＜0.05)。给药12周后，与SHR组比较，SHR各给药组血压均有显著下降(P＜0.05)，其中SHR+Los组下降程度最大，SHR+QDL组下降程度最小，两组相比差异有统计学意义(P＜0.05)，而SHR+QDH组与SHR+Los组相比差异无统计学意义。（表1，图1）
　　 2.免疫组织化学染色，观察胸主动脉外膜ADM,TGF-β1，Smad7的表达
　　 (1)ADM为胞浆表达，胞浆内出现的棕黄色颗粒为ADM抗原抗体复合物;测定ADM光密度值。结果显示:与WKY组比较，SHR组、SHR+QDH组、SHR+QDL组、SHR+Los组ADM的表达量均增多，差异有统计学意义(P＜0.01，P＜0.05)，而WKY+QDH组ADM的表达量差异无统计学意义（P＞0.05）;与SHR组比较，SHR+QDH组、SHR+QDL组、SHR+Los组ADM的表达均减少，差异有统计学意义（P＜0.05）;与SHR+QDH组相比较，SHR+QDL组ADM表达量更多，差异有统计学意义（P＜0.05），而SHR+Los组差异无统计学意义（P＞0.05）。（表2，图2）
　　 (2)TGF-β1为胞浆表达，胞浆内出现的棕黄色颗粒为TGF-β1抗原抗体复合物;测定TGF-β1光密度值。结果显示:与WKY组比较，SHR组、SHR+QDH组、SHR+QDL组、SHR+Los组TGF-β1的表达量均增多，差异有统计学意义(P＜0.01，P＜0.05)，而WKY+QDH组TGF-β1的表达量差异无统计学意义(P＞0.05);与SHR组较，SHR+QDH组、SHR+QDL组、SHR+Los组TGF-β1的表达均减少，差异有统计学意义（P＜0.05）;与SHR+QDH组相比较，SHR+QDL组TGF-β1表达量更多，差异有统计学意义（P＜0.05），而SHR+Los组差异无统计学意义（P＞0.05）。（表2，图3）
　　 (3)Smad7也为胞浆表达，胞浆内出现的棕黄色颗粒为Smad7抗原抗体复合物;测定Smad7光密度值。结果显示:与WKY组比较，SHR组、SHR+QDH组、SHR+QDL组、SHR+Los组Smad7的表达量均减少，差异有统计学意义(P＜0.01，P＜0.05)，而WKY+QDH组Smad7的表达量差异无统计学意义（P＞0.05）;与SHR组较，SHR+QDH组、SHR+QDL组、SHR+Los组Smad7的表达均增多，差异有统计学意义（P＜0.05）;与SHR+QDH组相比较，SHR+QDL组Smad7表达量更少，差异有统计学意义（P＜0.05），而SHR+Los组差异无统计学意义(P＞0.05)。（表2，图4）
　　 3.苦味酸-天狼星红染色，偏振光显微镜观察动脉外膜Ⅰ、Ⅲ胶原的表达
　　 比较不同组间大鼠胸主动脉外膜Ⅰ、Ⅲ型胶原面积百分比，结果显示:与WKY组比较，SHR组、SHR+QDH组、SHR+QDL组、SHR+Los组Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达量均增多，差异有统计学意义(P＜0.01，P＜0.05)，而WKY+QDH组Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达量差异无统计学意义（P＞0.05）;与SHR组较，SHR+QDH组、SHR+QDL组、SHR+Los组Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达均减少，差异有统计学意义（P＜0.05）;与SHR+QDH组相比较，SHR+QDL组Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达量更多，差异有统计学意义（P＜0.05），而SHR+Los组差异无统计学意义（P＞0.05）。（表3，图5）
　　 4.免疫荧光染色，激光共聚焦显微镜观察动脉外膜Ⅰ、Ⅲ胶原的表达
　　 分别测定Ⅰ、Ⅲ胶原的平均荧光强度(MFI)。结果显示:与WKY组比较，SHR组、SHR+QDH组、SHR+QDL组、SHR+Los组Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达量均增多，差异有统计学意义(P＜0.01，P＜0.05)，而WKY+QDH组Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达量差异无统计学意义(P＞0.05);与SHR组较，SHR+QDH组、SHR+QDL组、SHR+Los组Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达均减少，差异有统计学意义（P＜0.05）;与SHR+QDH组相比较，SHR+QDL组Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达量更多，差异有统计学意义（P＜0.05），而SHR+Los组差异无统计学意义(P＞0.05)。（表4，图6，图7）
　　 结论：
　　 QD不仅能够有效降低SHR大鼠血压，而且能够干扰TGF-β1/Smad信号转导通路，下调TGF-β1的表达，上调Smad7的表达，从而抑制TGF-β1/Smad信号转导通路的激活，减少Ⅰ、Ⅲ胶原的蛋白表达，具有拮抗作用的ADM随之下降，机体经过自身调节后达到一个新的平衡状态，从而改善和逆转高血压血管外膜重构。