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慢病毒介导ToxoROP16Ⅰ/Ⅲ通过抑制M1型细胞保护Caco-2细胞的实验性研究

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1 前言

2.材料与方法

2.1材料

2.1.1实验细胞

2.1.2主要试剂

2.1.3部分试剂配制

2.1.4主要仪器

2.2方法

2.2.1细胞培养

2.2.3 LPS诱导RAW264.7细胞向M1型细胞极化

2.2.4重组慢病毒质粒ROP16Ⅰ/Ⅲ稳转RAW264.7细胞向M2型细胞极化

2.2.5 Transwell共培养体系:IBD体外炎症模型的建立

2.2.6 Griess法检测细胞上清中NO的含量

2.2.7 Western blotting检测细胞极化状态

2.2.8 qRT-PCR检测细胞炎症因子的表达

2.2.9 ELISA法检测细胞炎症因子的表达

2.2.10流式细胞仪检测细胞凋亡

2.2.11统计分析

3结果

3.1重组慢病毒质粒ROP16Ⅰ/Ⅲ稳转RAW264.7细胞

3.2 LPS诱导RAW264.7细胞时间点的选择

3.3 LPS诱导RAW264.7向M1炎性细胞极化的结果

3.3.1 qRT-PCR法定量RAW264.7细胞向M1型炎性细胞极化的结果

3.3.2 ELISA法检测LPS诱导RAW264.7细胞向M1型炎性细胞极化的结果

3.3.3 Western blotting法检测M1型炎性细胞中iNOS蛋白的表达

3.3.4 Griess法检测细胞上清中NO的含量

3.4重组慢病毒质粒ROP16Ⅰ/Ⅲ诱导RAW264.7细胞向M2细胞极化的结果

3.4.2 qRT-PCR和ELISA法检测重组慢病毒质粒ROP16Ⅰ/Ⅲ转染RAW264.7细胞向M2细胞极化

3.5 Transwell共培养体系中M1型炎性细胞诱导Caco-2细胞凋亡

3.6 M1型细胞与M2细胞混合培养抑制Caco-2细胞凋亡

3.6.1 qRT-PCR和ELISA法检测M2型细胞下调M1型细胞炎症

3.6.2 流式细胞仪测M1炎性巨噬细胞和M2细胞混合培养抑制Caco-2细胞凋亡

4 讨论

5 结论

参考文献

附录

致谢

综述:弓形虫ROP16Ⅰ/Ⅲ与炎症性肠病的相关性研究进展

展开▼

著录项

  • 作者

    徐永伟;

  • 作者单位

    安徽医科大学;

  • 授予单位 安徽医科大学;
  • 学科 消化系病
  • 授予学位 硕士
  • 导师姓名 陈熙;
  • 年度 2019
  • 页码
  • 总页数
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 中文
  • 中图分类
  • 关键词

    慢病毒介导; 抑制; 细胞保护; Caco-2细胞;

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