声明
英文缩略词
1.前言
第一部分 ASⅣ对PA诱导HK-2细胞凋亡的保护作用
1.实验材料
1.1细胞
1.2 药品与试剂
1.3仪器
2． 实验方法
2.1 主要实验试剂的配制
2.2 HK-2细胞的培养
2.3 细胞分组
2.4 细胞形态学观察
2.5 MTT比色法检测细胞活力
2.6 细胞内脂质累积情况的检测
2.7 油红-苏木素染色检测细胞内脂质沉积情况
2.8 Annexinv-FITC / Pl细胞荧光双染
2.9Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡情况
2.10采用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧情况
2.11免疫蛋白印迹法(Western blott,WB)检测细胞内蛋白表达情况
2.12 超氧化物歧化酶(SOD)的测定
2.13微量还原型谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)的测定
3. 统计学处理
4. 实验结果
4.1 PA对HK-2细胞的影响
4.2 MTT法检测ASⅣ对细胞活力的影响
4.3 不同浓度ASⅣ对细胞内脂质累积的影响
4.4 不同浓度ASⅣ对细胞脂质沉积的影响
4.5 不同浓度ASⅣ对细胞凋亡的影响
4.6 不同浓度AS-Ⅳ对细胞内氧化应激反应的影响
4.7 不同浓度AS-Ⅳ对细胞内质网应激蛋白表达的影响
5. 小结
第二部分 ASⅣ保护HK-2细胞免受PA损伤的作用机制
1.实验材料与仪器
1.1 细胞
1.2 药品与试剂
1.3仪器
2.实验方法
2.1 主要实验试剂的配制
2.2 细胞分组
2.3 MTT比色法检测细胞活力
2.4 Annexinv-FITC/Pl细胞荧光双染
2.5 Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡情况
2.6 采用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧情况
2.7免疫蛋白印迹法(Western blott，WB)检测细胞内蛋白表达情况
3. 统计学处理
4. 实验结果
4.1 细胞增殖活力的检测
4.2 细胞凋亡情况的检测
4.3 细胞内活性氧表达的检测
4.4 WB法检测PA诱导后细胞内相关蛋白的表达
5. 小结
第三部分 讨论与结论
1. 讨论
2. 结论
参考文献
附录
致谢
综述:内质网应激在糖尿病肾病中的研究进展
