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【6h】

SGK1调控骨关节炎软骨细胞合成和分解代谢的分子机制研究

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中英文对照词表

1 引言

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 临床软骨组织标本

2.1.2 人原代软骨细胞

2.1.3 实验主要试剂

2.1.4 实验主要仪器

2.1.5 作图、图像分析和统计学软件

2.2.1 人原代软骨细胞的分离与培养

2.2.2 细胞传代

2.2.3 细胞冻存、复苏与计数

2.2.4 细胞的转染、药物处理

2.2.5 蛋白的提取

2.2.6 蛋白质免疫印迹实验

2.2.7 实时荧光定量聚合酶链式反应

2.2.8 免疫荧光染色实验

2.2.9 免疫组化染色实验

2.2.10 甲苯胺蓝染色实验

2.2.11 单丹磺酰尸胺染色实验

2.2.12 软骨细胞番红O染色实验

2.2.13 免疫共沉淀实验

2.2.14 统计学分析

3 结果

3.1 基于GEO数据库GSE113825数据集确立SGK1为研究靶基因

3.2 在软骨细胞中敲低SGK1减轻由IL-1β引起的合成和分解代谢失衡

3.3 在人原代软骨细胞中敲低SGK1减轻由IL-1β介导的自噬抑制作用

3.4 敲低SGK1通过上调人原代软骨细胞自噬水平减轻由IL-1β引起的代谢失衡

3.5 SGK1在人原代软骨细胞中直接结合、磷酸化FoxO1并调控其亚细胞定位

3.6 SGK1通过FoxO1调控软骨细胞自噬水平

4 讨论

4.1关于评价软骨细胞合成和分解代谢标志物的选择

4.2 促炎细胞因子与OA的关系

4.3 自噬与OA的关系

4.4 SGK1通过上调自噬水平抑制IL-1β介导的软骨细胞合成和分解代谢失衡

4.5 SGK1-FoxO1-自噬与关节软骨退变的关系

4.6 本研究的不足

4.7 下一步研究思路

5 结论

参考文献

附录

致谢

综述:炎症与骨关节炎软骨退变

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