延胡索乙素的立体选择性代谢及其对肝脏药物代谢酶的影响

摘要

本研究应用动物肝微粒体、人肝微粒体、人重组CYP450酶对延胡索乙素(tetrahydropalmatine,THP)对映体的立体选择性代谢进行了研究,确定了主要介导THP对映体立体选择性代谢的Ⅰ相代谢酶,同时还研究了THP对映体对小鼠肝微粒体中Ⅰ相代谢酶的诱导和抑制作用,以预测临床可能发生的代谢性药物相互作用。第一章延胡索乙素对映体在不同动物肝微粒体中的立体选择性代谢目的:考察延胡索乙素(tetrahydropalmatine, THP)对映体在动物肝微粒体中的立体选择性代谢,并阐明参与THP对映体立体选择性代谢的主要CYP450酶亚型。方法:将THP对映体和不同动物的肝微粒体(猴,狗,小鼠,大鼠)进行体外共孵育,用反相HPLC法测定孵育体系中左旋延胡索乙素((-)-tetrahydropalmatine,(-)-THP)和右旋延胡索乙素((+)-tetrahydropalmatine,(+)-THP)的浓度变化;测定(-)-THP和(+)-THP在动物肝微粒体中的酶动学参数并进行比较;考察各种主要CYP450酶抑制剂对大鼠肝微粒体代谢(-)-THP和(+)-THP的影响,以初步确定参与THP代谢的主要CYP450亚型;考察系列浓度的CYP450抑制剂酮康唑(0.1～1μmol/L)和伏氟沙明(2～20μmol/L)对(-)-THP和(+)-THP在地塞米松(dexamethason,Dex)和β-萘黄酮(β-naphthoflavone,β-NF)诱导的大鼠肝微粒体(rat liver microsomes,RLM)中代谢的影响。结果:在猴,狗,小鼠,大鼠动物肝微粒体中,(+)-THP的代谢程度均显著大于(-)-THP(P＜0.05、P＜0.01或P＜0.001);与未经药物诱导的大鼠肝微粒体(RLM)比较,Dex和β-NF诱导的大鼠肝微粒体对(-)-THP和(+)-THP的代谢程度均显著增加;在Dex诱导的大鼠肝微粒体(Dex-RLM)中,(+)-THP代谢增加的幅度明显大于(-)-THP,而在β-NF诱导的大鼠肝微粒体(β-NF-RLM)中,(-)-THP和(+)-THP代谢增加的幅度相当;20μmol/L伏氟沙明和酮康唑对THP对映体在RLM中的代谢存在明显的抑制作用。猴肝微粒体(MLM)、狗肝微粒体(DLM)、小鼠肝微粒体(mLM)、RLM、Dex-RLM、β-NF-RLM对(-)-THP和(+)-THP的酶动力学参数Km值分别为33.88和22.41、63.52和47.75、52.60和31.22、30.39和41.73、31.43和13.31、6.560和20.55μmol/L,Clint值分别为42.99和71.69、7.570和32.07.31.64和90.23.29.01和77.24.107.6和617.2.274.O和222.1μL/min/mg protein;酮康唑和伏氟沙明对(-)-THP和(+)-THP在Dex-RLM和β-NF-RLM的抑制均呈现浓度依赖性,酮康唑在Dex-RLM中的抑制作用强于其在β-NF-RLM中的作用,且其对(+)-THP的抑制作用强于(-)-THP,而伏氟沙明在β-NF-RLM中的抑制作用强于其在Dex-RLM中的作用,且对(-)-THP的抑制作用强于(+)-THP。结论:各种动物肝微粒体对THP的代谢呈现立体选择性,对(+)-THP清除率显著大于(-)-THP;在大鼠肝微粒体中主要由CYP3A1/2和CYP1A2参与THP对映体代谢,其中CYP3A1/2对(+)-THP有较好的选择性,而CYP1A2对(-)-THP有较好的选择性。目的:考察THP对映体在人体外代谢模型中的立体选择性代谢,并阐明主要参与THP对映体立体选择性代谢的CYP450酶亚型及其作用。方法:用混合的正常人肝微粒体(mixed human liver microsomes, mixed-HLM)、CYP1A2高活性的单个人肝微粒体(IANO human liver microsomes,IANO-HLM)、重组人CYP3A4和CYP1A2(recombinant CYP3A4,rCYP3A4和recombinant CYP1A2,rCYP1A2)和THP对映体进行共孵育,用反相HPLC法测定(-)-THP和(+)-THP的浓度;用终浓度为20μmo1/L主要CYP450酶的抑制剂对(-)-THP和(+)-THP在mixed-HLM的代谢进行抑制,以初步筛选主要参与THP代谢的CYP450酶亚型;在初步筛选的基础上进一步用抑制剂酮康唑和伏氟沙明对(-)-THP和(+)-THP在mixed-HLM和IANO-HLM中的代谢进行抑制。结果:在mixed-HLM和CYP1A2高活性的IANO-HLM中,(+)-THP的代谢均显著大于(-)-THP,IANO-HLM中(-)-THP和(+)-THP的代谢相比1nixed-HLM中的代谢有明显增加,同时又以(+)-THP代谢增加的幅度更为明显;20μmol/L伏氟沙明和酮康唑对THP对映体在mixed-HLM中的代谢存在较为明显的抑制作用;伏氟沙明在IANO-HLM中的抑制作用强于其在mixed-HLM中的作用,且其对(+)-THP的抑制作用强于(-)-THP,而酮康唑在mixed-HLM中的抑制作用强于其在IANO-HLM中的作用,但对于THP对映体的抑制作用相当。(+)-THP在rCYP1A2中的代谢显著大于(-)-THP,而两者在rCYP3A4的代谢则无明显差异。结论:HLM对THP对映体的代谢存在立体选择性,CYP1A2和CYP3A4为参与代谢THP对映体的主要CYP亚型;与其在RLM中代谢不同,CYP1A2倾向选择性代谢(+)-THP,而CYP3A4对THP对映体的代谢不存在立体选择性。第三章THP对映体对小鼠CYP450酶诱导和抑制作用研究目的:考察THP对映体对小鼠肝脏主要CYP450酶的体外抑制及体内诱导作用,从而预测其在临床上可能发生的代谢性药物相互作用,为临床合理用药提供科学依据。方法:以探针底物法,考察左旋延胡索乙素((-)-tetrahydropalmatine,(-)-THP)和右旋延胡索乙素((+)-tetrahydropalmatine,(+)-THP)体外对小鼠肝微粒体主要Ⅰ相代谢酶CYP1A2、CYP2C、CYP2D22、CYP2E1、CYP3A11活性的影响;采用微粒体体外孵育“鸡尾酒”法(cocktail法),考察小鼠经高、低剂量(-)-THP和(+)-THP(240 mg·kg-1和60mg·kg-1)连续灌胃7天后,其肝微粒体中主要Ⅰ相代谢酶活性的变化,以评价(-)-THP和(+)-THP对小鼠肝微粒体主要CYP450酶是否具诱导作用。结果:(-)-THP和(+)-THP体外对小鼠肝微粒体主要的CYP450Ⅰ相代谢酶的抑制作用均不强,(+)-THP对CYP2C抑制的IC50为43.89μmol/L,两者对本研究考察的其它CYP亚型的IC50均大于100μmol/L;与溶剂处理组比较,小鼠经60 mg/kg和240 mg/kg的(-)-THP处理后,CYP1A2活性分别增加了68.7％和73.0%(P＜0.05,P＜0.01),经240mg/kg的(-)-THP处理后,小鼠CYP2C37活性增加了80.4%(P＜0.05),(-)-THP对其余CYP亚型活性未显示明显影响;(+)-THP对本研究考察的所有CYP亚型均未显示明显影响。结论:(-)-THP,(+)-THP体外对小鼠肝微粒体CYP主要亚型的抑制作用较弱；(-)-THP对小鼠肝微粒体CYP1A2、CYP2C37有一定的诱导作用,(+)-THP对小鼠肝微粒体主要CYP450酶亚型无明显诱导作用。

目录

致谢

摘要

Abstract

英文缩略词表

引言

第一章 延胡索乙素对映体在不同动物肝微粒体中的立体选择性代谢

1 实验仪器与材料

2 实验方法

3 实验结果

4 小结与讨论

第二章 THP对映体在人体外代谢模型中的立体选择性代谢

1 实验仪器与材料

2 实验方法

3 实验结果

4 小结与讨论

第三章 THP对映体对小鼠CYP450酶诱导和抑制作用研究

1 实验仪器与材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

第四章 中药元胡的化学、药理及药代动力学研究进展(综述)

1.元胡的化学成分

2.元胡的药理作用

3.元胡有效成分的代谢及动力学研究

4 小结

第五章 结论

参考文献

作者简历