整合素αIIbβ3介导的信号通路负反馈抑制血小板激活

摘要

整合素αⅡbβ3介导的“outside-in(outside-in)”的信号转导被广泛的认为是扩大血小板激活反应的，然而越来越多的证据表明“outside-in”的信号转导在某些情况下可以抑制血小板的激活。为了弄明白整合素αⅡbβ3介导的“outside-in”信号通路对血小板激活的确切作用，我们通过血小板聚集仪，流式细胞仪，免疫印迹及免疫共沉淀等方法发现(1)整合素αⅡbβ3的抑制剂RUC2和RGD-peptide对低剂量CRP和TRAP引起的血小板ATP释放起促进作用。说明整合素αⅡbβ3介导的“outside-in”信号通路抑制血小板ATP释放。因为血小板释放对血小板聚集起扩大作用，所以整合素αⅡbβ3介导的“outside-in”信号通路具有负调控血小板聚集的作用。(2)在ADP为刺激剂的情况下，血小板聚集时Talin和Kindlin-3结合到整合素β3亚基上，当血小板解聚时，Talin和Kindlin-3从整合素β3上脱落下来。加入RGD-peptide抑制Talin和Kindlin-3从整合素αⅡbβ3上脱落。说明是整合素αⅡbβ3介导的“outside-in”信号通路参与调节Talin和Kindlin-3从整合素β3上脱落。(3)当刺激剂诱导整合素αⅡbβ3激活时，Akt发生磷酸化;而激活的整合素和配体纤维蛋白原结合，血小板发生聚集后，Akt发生去磷酸化，PI3K信号通路失活。加入整合素抑制剂RGD-peptide后，Akt的去磷酸化作用被抑制。说明Akt失活是由整合素αⅡbβ3“outside-in”信号通路介导的。(4)我们加入SHIP-1抑制剂3AC后，Akt去磷酸化作用被抑制。说明SHIP-1参与调节Akt的去磷酸化作用。(5)SHIP-1的抑制剂3AC抑制血小板解聚，同时恢复ADP诱导的血小板ATP释放，而且能消除整合素介导的从外到内信号通路对血小板ATP释放的抑制效应。说明整合素介导的从外到内的信号通路通过激活SHIP-1，进而抑制血小板ATP的释放，所以SHIP-1是血小板聚集的负调控蛋白。这些结果暗示整合素αⅡbβ3介导的“outside-in”的信号转导可能启动了一个负反馈通路通过促进Talin和Kindlin-3从整合素上脱落使得整合素失活和激活SHIP-1导致P13K/Akt信号通路失活这两个方面抑制整合素的激活。

目录

声明

致谢

摘要

缩略词表

1 引言

2 材料和方法

2．1 实验对象

2．2 主要实验仪器

2．3 主要试剂

2．4 主要实验试剂及其配制

2．5 实验方法

3 实验结果

3．1 整合素αIIbβ3的抑制剂增强了低剂量激动剂诱导的人血小板ATP的释放

3．2 整合素αIIbβ3缺失增加了低剂量刺激剂诱导的人血小板ATP的释放

3．3 整合素αIIbβ3在血小板聚集时激活，在血小板解聚过程中发生失活

3．4 血小板聚集体解聚过程中，Talin和Kindlin-3从整合素β3上脱落下来

3．5 整合素αIIbβ3介导的“outside-in’’信号通路激活SHIP-1，导致PI3K／Akt信号通路失活

3．6 SHIP-1抑制剂3AC抑制血小板解聚，促进血小板ATP释放

4 讨论

5 小结

6 结论

参考文献

综述 整合素失活的机制研究

作者简历及在学期间所取得的科研成果