吗啡胶体金免疫层析试纸条的研究与开发

摘要

本文应用胶体金免疫层析技术进行吗啡(MOR)药物滥用的尿液及唾液检测研究。为了研制吗啡胶体金免疫层析试纸条，本研究利用吗啡偶联物抗原来制备单克隆抗体，采用微波加热方法制备20nm胶体金，鉴定质量后标记单克隆抗体。将金标抗体喷涂在聚酯膜上，MOR-BTG包被在硝酸纤维素膜上，制成快速检测试纸条。 首先本文在传统的微波加热法的基础上进行改进，制备胶体金。研究了不同的加热时间和还原剂对胶体金制备的影响，并将改进的微波法与传统微波法、电热套法和磁力搅拌法进行比较，结果表明，改进的微波法更适于制备单分散性小粒径的胶体金。 本文还利用混合酸酐法将MOR和牛血清白蛋白(BSA)、牛甲状腺球蛋白(BTG)偶联，偶联物分别作为免疫抗原和包被抗原。再用免疫抗原MOR-BSA免疫得到抗吗啡单克隆抗体。 最后通过比较不同的金标蛋白标记条件、不同的材料、聚酯膜上金标的喷涂量、抗原和二抗的包被浓度等对检测结果的影响，确立了最佳条件，成功建立了尿液和唾液联检吗啡的胶体金免疫层析方法。该法能在5分钟内完成对吗啡的检测，尿样和唾液的最小检测限分别为300ng/ml、20ng/ml，无需借助检测仪器；取样方便，检测时间段宽，适用于对吗啡进行现场快速检测。 本研究也可为其它药物滥用检测试纸条的研究提供借鉴。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

第一章文献综述

1.1吗啡检测研究进展

1.1.1概述

1.1.2毒品对人体的危害

1.1.3国内外毒品现状

1.1.4吗啡在体内的代谢

1.1.5吗啡检测样品

1.1.6吗啡检测分析方法

1.2胶体金免疫层析技术及其应用

1.2.1胶体金的制备

1.2.2抗体标记

1.2.3蛋白质在膜上的固定

1.3国内外研究现状

1.4本文研究的主要内容

第二章胶体金微波制备的研究

2.1材料与方法

2.1.1试剂

2.1.2处理液配方

2.1.3实验仪器

2.1.4方法

2.2结果与讨论

2.2.1加热时间对胶体金制备的影响

2.2.2不同还原剂量对胶体金制备的影响

2.2.3微波制备胶体金和传统制备的比较

2.2.4微波制备胶体金方法的改进

2.3小结

第三章吗啡抗原和单克隆抗体的制备

3.1原理

3.2材料

3.2.1试剂与材料

3.2.2主要仪器

3.3方法

3.3.1牛血清白蛋白-吗啡(BSA-MOR)免疫抗原的合成

3.3.2 BTG—MOR包被抗原的合成

3.3.3偶联载体蛋白浓度的测定

3.3.4半抗原与载体蛋白偶联物的鉴定

3.3.5单克隆抗体的制备

3.4实验结果与讨论

3.4.1吗啡抗原的偶联效果

3.4.2抗原制备

3.5小结

第四章胶体金免疫层析检测吗啡试纸条的制备

4.1胶体金免疫层析竞争法的原理

4.2材料与方法

4.2.1试剂与耗材

4.2.2仪器

4.2.3胶体金免疫层析试纸条的制备流程

4.2.4金标记结合物的制备和纯化

4.2.5聚酯膜上金标喷涂量的确定

4.2.6 NC膜材料的选择

4.2.7 NC膜上抗原和二抗固定的研究

4.2.8免疫层析试纸条的组装

4.2.9吗啡免疫层析试纸条的测试

4.3结果与讨论

4.3.1吗啡单克隆抗体与胶体金结合条件的研究

4.3.2聚酯膜上金标喷涂量的确定

4.3.3 NC膜材料的选择

4.3.4抗原和二抗在NC膜上固定的研究

4.3.5免疫层析试纸条的测试

4.4小结

第五章结论

参考文献

发表论文和科研情况说明

致 谢