非洲猪瘟病毒胶体金免疫层析试纸条的研制

摘要

为初步建立一种能快速检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的胶体金免疫层析试纸条检测技术,本试验通过原核表达、纯化获得ASFV pK205R蛋白,制备兔抗多克隆抗体.根据胶体金免疫层析原理,用金颗粒标记纯化的兔抗pK205R抗体作为金标垫,同时纯化的抗体作为检测线(T线)捕获抗原,用葡萄球菌A蛋白(SPA)作为质控线(C线),经过对工作条件的优化,实现ASFV胶体金检测试纸条的制备.结果 显示,原核表达的ASFV pK205R蛋白约为44 kDa,金标抗体的最佳标记量约为40 μg/mL,最佳pH为7.5,T线抗体标记最适浓度约为1.5 mg/mL,C线标记SPA最适浓度约为2 mg/mL,且建立的方法具有较高的检测特异性,对表达的重组蛋白的最小检测量为30～ 40 ng/mL.该方法的建立为快速及时检测ASFV提供了技术储备,为ASFV基础研究提供参考依据.