Tau蛋白在比格犬慢性缺血性脑白质脱髓鞘中的研究

摘要

本研究通过研究Tau蛋白及其相关因子在慢性缺血性脑白质脱髓鞘病变中的表达水平的变化，探讨Tau蛋白在缺血性脑白质脱髓鞘病变机制中的角色及其可能影响。
　　本研究将16只成年比格犬按照完全随机数字表法分别分为假手术组A及实验组B、C、D（每组各4只），应用四血管结扎法制作不同程度比格犬脑缺血动物模型。选取双侧侧脑室部位脑白质，采用HE染色观察各组中脑白质的病理变化。采用LFB对脑白质进行髓鞘染色，对脱髓鞘病变进行评分后比较各组脑白质脱髓鞘病变程度。用NG2标记少突胶质细胞前体（OPCs）、CNPase标记成熟少突胶质细胞（OLs），采用免疫组化方法检测Tau、p-Tau、NG2、CNPase、Fyn表达水平。采用采用Spearman秩相关性分析Tau、p-Tau、NG2、CNPase、Fyn之间的相关性。
　　研究结果：(1)HE染色可见慢性脑缺血后脑白质缺血性改变及脑白质脱髓鞘病理改变，LFB染色后可见明显脱髓鞘改变，对脱髓鞘病变程度进行评分显示与假手术组A（1.50±0.5345）比较实验组B（2.25±0.4629）、实验组C（2.50±0.5345）及实验组D（2.75±0.4629）组在侧脑室白质脱髓鞘病变严重程度更高（P<0.05），且随着缺血程度越高脱髓鞘病变越重。
　　(2)免疫组化检测各指标的表达情况，以平均光密度值作量化，与假手术组A（0.1392±0.0310）相比实验组B（0.2143±0.0214）、实验组C（0.1851±0.0283）、实验组D（0.1840±0.0461）组中Tau蛋白在侧脑室脑白质表达水平增高（P<0.05）。实验组B（0.2081±0.0171）、实验组C（0.2119±0.0111）、实验组D（0.2254±0.0125）与假手术组A（0.1845±0.0118）相较p-Tau在侧脑室脑白质表达明显增高（P<0.05）。与假手术组A（0.1470±0.0213）相比实验组B（0.1769±0.0.0181）、实验组C（0.1693±0.0169）、实验组D（0.1703±0.0155）组中NG2在侧脑室脑白质表达水平明显增高(P<0.05）。与假手术组 A（0.2874±0.0242）相比实验组 B（0.2404±0.0298）、实验组C（0.2183±0.0132）、实验组D（0.2178±0.0212）组中 CNPase在侧脑室脑白质表达水平明显降低(P<0.05）。与假手术组 A（0.2224±0.0487）相比实验组B（0.2011±0.0491）、实验组C（0.1897±0.0490）、实验组D（0.1606±0.0362）组中Fyn在侧脑室脑白质表达水平明显降低（P<0.05）。(3)通过对上述各因子在各组的表达水平进行Spearman秩相关性分析后，结果显示Tau蛋白与p-Tau蛋白表达水平变化呈负相关（r=-0.268，P=0.008），Tau与NG2的表达水平呈正相关（r=0.277，P=0.006）。Tau与CNPase的表达水平成负相关（r=-0.303，P=0.003）。p-Tau与CNPase的表达水平成负相关（r=-0.509，P=0.001）。NG2与CNPase的表达水平为负相关（r=-0.402,P=0.001）。
　　本研究结论：1.比格犬慢性脑缺血损害可导致侧脑室脑白质脱髓鞘病变；2.Tau蛋白在慢性脑缺血时的表达增加可能与少突胶质前体细胞分化成熟障碍相关，进而影响髓鞘生成；3.在慢性缺血性脑白质脱髓鞘病变中Tau蛋白的异常磷酸化水平与缺血程度正相关，Tau的异常磷酸化降低了其与酪氨酸激酶Fyn的绑定，导致了髓鞘早期形成过程的异常。

目录

声明

第一章 绪论

1.1研究背景与意义

1.2 国内外相关研究

1.3 本论文的主要工作

1.4 本论文的结构安排

第二章 材料与方法

2.1 材料

2.2 主要实验试剂与仪器

2.3 方法

2.4 标本留取

2.5 HE染色及LFB髓鞘染色

2.6 免疫组织化学染色

2.7 采图及检测平均光密度值

2.8 统计学方法

第三章 结 果

3.1 HE染色结果

3.2 Luxol Fast Blue髓鞘染色结果

3.3 各组中Tau蛋白的表达

3.4各组中p-Tau的表达

3.5 各组中NG2蛋白聚糖的表达

3.6 各组中CNPase的表达

3.7 酪氨酸激酶Fyn在各组中的表达

3.8 Tau、p-Tau、NG2、CNPase及Fyn表达水平相关性分析

第四章 讨论

第五章 结论与展望

5.1 结论

5.2 本文的主要贡献

5.3 下一步的工作展望

致谢

参考文献

硕期间取得的研究成果