环巴胺联合阻断EphB4抑制前列腺癌淋巴管生成的实验研究

摘要

目的：研究观察环巴胺（cyclopamine）联合阻断EphB4基因对前列腺癌PC3细胞的生长增殖及淋巴管生成的影响； 方法：应用MTT法检测cyclopamine对PC3细胞生长的抑制效应。倒置相差显微镜观察细胞形态学变化。应用流式细胞仪检测cyclopamine对PC3细胞生长周期的影响；以40例前列腺癌组织为实验标本,以10例良性前列腺增生（BPH）组织为对照组，采用免疫组织化学染色法检测EphB4、LYVE-1的表达。根据LYVE-1染色结果计数微淋巴管密度（MLD）；化学合成siRNA并转染PC3细胞，应用MTT法检测siRNA对PC3细胞生长的影响；采用Western Blot和RT-PCR检测其对PC3细胞EphB4基因的沉默效应。 结果： 1. Cyclopamine 5.0μmol/L即可明显地抑制前列腺癌PC3细胞的生长,且5.0μmol/L～20.0μmol/L浓度的cyclopamine可呈剂量时间依赖性地抑制前列腺癌PC3细胞的生长；前列腺癌PC3细胞的DNA合成可被cyclopamine(10.0μmol/L)阻滞,S期细胞比例明显地下降,其G2期细胞比例明显上升,出现明显的G2期阻滞。 2. 相比良性前列腺增生（BPH），EphB4在前列腺癌组织中高表达,MLD值显著低于良性前列腺增生（BPH）；在激素非依赖性前列腺癌组织中EphB4表达阳性率显著高于激素依赖性前列腺癌组织；肿瘤分化程度为中低分化、临床病理分期>T2、有淋巴结转移及远处转移的前列腺癌组织中EphB4阳性率、MLD值显著高于肿瘤分化程度为高分化、临床病理分期=