应用小分子干扰RNA技术以慢病毒为载体抑制乳腺癌淋巴管生成因子VEGF-C的实验研究

摘要

目的 研究VEGF-C特异性小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对乳腺癌淋巴管生成因子-血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor C,VEGF-C)表达水平及乳腺癌细胞转移能力的影响.方法 实验分为感染RNAi靶点病毒的细胞组(KD组)、感染阴性对照病毒的细胞组(NC组)和未感染任何病毒的细胞组(CON组).以慢病毒为载体将靶向VEGF-C基因的siRNA导入体外培养的乳腺癌MDA-MB-231细胞系,应用Real-time PCR和Western blot技术检测各组细胞VEGF-C mRNA水平和蛋白水平表达差异,通过小室侵袭实验观察各组细胞侵袭能力.结果 与细胞体外共培养3d后慢病毒具有较高的感染效率,在荧光显微镜下观察其感染效率达70％ 以上.与NC组、CON组比较,KD组细胞VEGF-C在mRNA水平表达明显降低,抑制率达60％ 以上,差异有统计学意义(P<0.05);在蛋白水平,KD组也受到明显抑制,条带明显模糊变淡.小室侵袭实验显示,KD组较NC组、CON组侵袭能力明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 以慢病毒为载体,特异性siRNA能够有效抑制VEGF-C的表达及乳腺癌细胞的侵袭能力,为预防与治疗乳腺癌淋巴道转移提供实验依据,同时也为下一步动物实验奠定基础.