白藜芦醇通过抑制死亡受体凋亡途径减轻顺铂所致的急性肾损伤

摘要

目的:
　　急性肾损伤（acute kidney injury, AKI）是以肾小球滤过功能急剧（数小时至数天内）下降为特点的多因素多阶段的临床综合征，其临床特点主要有氮质血症等等累及机体各系统的改变，可伴有少尿甚至无尿。AKI发病率高，据统计，每年无需透析治疗的AKI患病率约为5000例/百万人，需透析治疗的AKI患病率约为295例/百万人。全世界每年约超过2百万人死于AKI，并且呈逐年增加趋势，已成为医疗卫生支出中的巨大负担：一年美国整个社会花100亿美元来治疗AKI。AKI病因复杂，在繁多的病因中肾脏血液供应减少或毒性药物的使用导致的急性肾小管坏死最为常见，对肾脏产生毒性药物所导致的AKI约占20％。顺铂(cisplatin，CP)是一类以金属铂为基础的抗肿瘤药物，现已作为肿瘤标准化疗方案的一部分，被广泛应用于多种实体肿瘤的治疗中。然而在CP的临床应用中，尤以AKI为代表的肾毒性副作用最为常见且最为严重。CP倾向集聚在肾脏小管上皮细胞中，可导致肾脏小管功能紊乱，导致AKI发生。CP所致AKI主要相关机制复杂。细胞凋亡对这个疾病具有重要的影响，它可以发生于肾单位的肾小管中，干扰上皮细胞的功能。
　　机体细胞凋亡可以有多条通路，在外源性凋亡途径中，肿瘤坏死因子受体-1(TNFR1)和Fas都是肿瘤坏死因子受体超家族成员之一，他们分别与各自相应的配体TNF-α及Fas-L相结合，在细胞膜上形成凋亡诱导复合物，从而激活外源性凋亡途径发生，阻止死亡受体介导的凋亡通路可以作为治疗急性肾损伤的一大作用靶点。
　　白藜芦醇(resveratrol，RSV)，化学名为芪三酚，多酚类物质之一，生物活性强大，见于花生、葡萄等植物里。由于其强大的抗炎、抗氧化和细胞保护等功能，RSV表现出广泛的生物学作用，如抗基因突变、抗血小板聚集及调节血脂等，对癌症和冠心病等多种疾病发挥着预防及治疗作用。近几年，RSV在肾脏疾病中的应用得到重视，多项研究证实其在肾脏疾病中的预防及治疗中获得良好收益。但RSV对AKI的预防治疗作用与机制尚未阐述清楚。本实验设计旨意在探寻RSV是否减轻CP所引起的AKI以及探索其中的效果和作用机制。
　　方法:
　　将28只雄性Wistar大鼠随机分成4组:(1)对照组:在实验第1日及第3日把生理盐水注入到本组实验大鼠的腹腔里，用量10ml/kg;(2)白藜芦醇组:在实验第1日及第3日把RSV注入到本组实验大鼠的腹腔里，药物量10mg/kg(RSV用生理盐水配好，c=2mg/ml);(3)顺铂组:在实验第1日把CP注入到本组实验大鼠的腹腔里，药物量8mg/kg(CP用生理盐水配好，c=1mg/ml)，并在实验第3日把生理盐水注入到实验大鼠的腹腔里，生理盐水量10ml/kg;(4)顺铂+白藜芦醇组:在实验第1日把CP注入到实验大鼠的腹腔里，剂量8mg/kg，30分钟后把RSV注射到实验大鼠的腹腔里，药物量10mg/kg;并在实验第3日把RSV注入到实验大鼠的腹腔里，药物量10mg/kg。在实验第5日处死实验模型、称重，保留其肾脏组织及血，测量大鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和肾脏系数(RI)，高倍镜观察大鼠肾脏组织形态表现及凋亡情况，蛋白印迹法及免疫组化法比较各组大鼠肾脏组织死亡受体凋亡途径的分子蛋白量水平高低。
　　结果:
　　1.各组大鼠肾脏功能指标和肾脏系数比较: CP组中大鼠Scr、BUN及RI水平比NS组升高(P＜0.05)。在应用RSV干预之后出现改善趋势， CP+RSV组比CP组中大鼠Scr、BUN及RI水平呈现下降趋势(P＜0.05)。
　　2.各组大鼠肾脏组织病理:NS组与RSV组大鼠肾小管形态正常，细胞完整。CP组大鼠肾小管结构模糊，细胞肿胀，可见细胞水肿、空泡样变及细胞坏死。而CP+RSV组大鼠比CP组细胞结构较为完整，肾小管形态保持较好，仅有小部分细胞出现轻微肿胀及脱落，坏死细胞减少。
　　3.各组大鼠肾小管细胞凋亡比较:NS组与RSV组中只有极个别TUNEL阳性的细胞。在CP组中，TUNEL阳性凋亡细胞显著增多(P＜0.05)。而CP+RSV组比CP组TUNEL阳性凋亡细胞减少(P＜0.05)。
　　4.各组大鼠肾脏外源性凋亡通路标志性蛋白的表达水平对比:CP组中Fas-L、TNF-α和caspase-8蛋白水平比NS组蛋白水平升高(P＜0.05);在加用RSV药物干预后，CP+RSV组中Fas-L、TNF-α和caspase-8蛋白表达量比CP组下降(P＜0.05)。另外， CP组中大鼠肾脏组织中BID及Bcl-2蛋白水平比NS组蛋白水平减少和CP组Bax蛋白水平比NS组蛋白水平升高(P＜0.05);在加用RSV药物干预后，CP+RSV组中BID及Bcl-2蛋白水平增多和Bax蛋白水平减少(P＜0.05)。
　　结论:
　　白藜芦醇通过抑制死亡受体凋亡途径减轻顺铂所致的急性肾损伤。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

附表

附图

参考文献

综述：白藜芦醇在肾脏疾病中的研究进展

致谢

攻读硕士期间发表论文