声明
缩略语
第 1 章 前言
1.1 TNF-α的概述
1.1.1 TNF-α的生物学特性
1.1.2 TNF-α的来源
1.1.3 TNF-α与疾病
1.1.4 TNF-α的检测方法
1.2 纳米抗体
1.2.1 纳米抗体的发现及来源
1.2.2 纳米抗体的性质
1.2.3纳米抗体的应用
1.3 电化学免疫传感器
1.3.1 检测原理
1.3.2 纳米抗体作为检测元件的电化学免疫传感器
1.3.3 电化学检测方法
1.4 主要研究内容和意义
1.4.1 主要研究内容
1.4.2 研究意义
第 2章抗TNF-α纳米抗体噬菌体展示文库的构建
2.1 实验试剂与仪器
2.1.1 实验试剂
2.1.2 主要实验仪器
2.1.3 溶液和培养基的配制
2.1.4 主要菌株
2.2 方法与步骤
2.2.1羊驼免疫
2.2.2间接ELISA测血清效价
2.2.3纳米抗体文库的构建
2.3 结果与分析
2.3.1免疫效价的检测
2.3.2淋巴细胞和总RNA的提取
2.3.3 VHH基因片段的巢式PCR扩增
2.3.4抗体库的鉴定
2.4 讨论与小结
2.4.1 讨论
2.4.2 小结
第 3章抗TNF-α纳米抗体噬菌体文库的淘选
3.1 实验试剂与仪器
3.1.1 实验试剂
3.1.2 主要实验仪器
3.1.3 实验溶液和培养基的配制
3.2 方法与步骤
3.2.1 M13K07辅助噬菌体的扩增及滴度测定
3.2.2 抗TNF-α纳米抗体噬菌体文库的淘选
3.2.3 阳性噬菌体克隆的鉴定及分析
3.3 结果与分析
3.3.1噬菌体的亲和淘选
3.3.2 阳性噬菌体克隆的鉴定
3.3.2 阳性噬菌体的序列分析
3.4 讨论与小结
3.4.1 讨论
3.4.2 小结
第 4章抗TNF-α纳米抗体的表达及活性鉴定
4.1 实验试剂与仪器
4.1.1 实验试剂
4.1.2 主要实验仪器
4.1.3 溶液和培养基的配制
4.1.4 主要菌株
4.2 方法与步骤
4.2.1 电转感受态细胞Rosetta的制备
4.2.2 阳性克隆表达载体的构建
4.2.3 抗TNF-α纳米抗体的诱导表达与纯化
4.2.4 纳米抗体活性的亲和性比较
4.2.5 纳米抗体活性的特异性比较
4.3 结果与分析
4.3.1噬菌粒载体的酶切验证
4.3.2 pET25b-Nb重组表达载体的电转化及菌落PCR
4.3.3 目的蛋白的诱导表达
4.3.4 目的蛋白亲和力的鉴定
4.3.5 纳米抗体特异性的鉴定
4.4 讨论与小结
4.4.1 讨论
4.4.2 小结
第 5章抗TNF-α纳米抗体在电化学免疫传感器中的应用
5.1 实验试剂与仪器
5.1.1 实验试剂
5.1.2 主要实验仪器
5.1.3 实验溶液的配制
5.2 方法与步骤
5.2.1 电化学免疫传感器制备原理图
5.2.2 电化学免疫传感器制备
5.3 结果与分析
5.3.1 传感器制备过程的表征
5.3.2 标准曲线的建立
5.3.3 加标回收实验
5.4 讨论与小结
5.4.1 讨论
5.4.2 小结
第 6章结论与展望
6.1 结论
6.2 展望
致谢
参考文献
