复合载体固定化酶亲和色谱筛选脂肪酶抑制剂的研究

摘要

亲和色谱(Affinity chromatography)是一种基于生物活性分子与生物大分子间特异性相互作用的分离技术。该技术可有效分离纯化具有生物活性的物质,已广泛应用于药物筛选和药靶鉴别等领域。脂肪在体内被脂肪酶水解成甘油和脂肪酸,然后被人体吸收。因此,脂肪酶是影响脂肪代谢的关键酶,降低其活性,可有效控制人体对脂肪的摄入。目前,脂肪酶抑制剂作为有效的体重控制及减肥药物已得到高度关注。本论文针对从中药及天然产物中脂肪酶抑制剂的快速、高效筛选问题,对筛选方法、脂肪酶固载及应用进行了研究。
　　 论文主要工作如下:
　　 1、建立了从中药山楂中筛选脂肪酶抑制剂的气相色谱法,并探讨了山楂提取物对脂肪酶的抑制活性及机理。以三丁酸甘油酯为底物,采用猪胰脂肪酶抑制剂活性筛选模型对各组分进行筛选。Dixon图和Lineweaver-Burk图表明山楂提取物对胰脂肪酶的抑制作用为非竞争性抑制,Ki=0.91 g/L。用水、乙醇、氯仿、乙酸乙酯作为提取剂提取的山楂提取物的IC50分别为17.44 mg/mL、7.0 mg/mL、2.91 mg/mL、1.31 mg/mL,表明山楂的乙酸乙酯提取物对脂肪酶的抑制活性最高。
　　 2、以硅胶负载壳聚糖为载体,通过共价结合的方法将脂肪酶固定在复合载体上,克服了纯壳聚糖作为基质时存在的酸溶、质软、成形难和纯硅胶非特异性吸附强的缺点。优化了硅胶与壳聚糖固定脂肪酶的最佳比例、戊二醛交联浓度、固定化时间等。对固定化酶的性质研究表明该固定化脂肪酶在pH适用范围、重复利用率和热稳定性等方面均有明显改善。
　　 3、建立了复合载体固定化脂肪酶-亲和筛选脂肪酶抑制剂方法,并用已知的脂肪酶抑制剂黄芩苷和塞利司他验证了方法的可行性。在亲和筛选过程中,加入Li+来降低载体上硅胶残留的硅羟基活性,降低了亲和筛选的非特异性吸附,同时也使得固定化酶的活性得到提高。用这种方法初步从中药黄芩中筛选出了具有脂肪酶抑制作用的活性成分。

目录

文摘

英文文摘

第一章 绪论

1.1 引言

1.2 脂肪酶

1.3 脂肪酶与肥胖

1.4 脂肪酶的固定化

1.5 亲和色谱简介

1.6 脂肪酶抑制剂的研究进展

1.7 文章的研究思想和主要内容

第二章 山楂提取物对脂肪酶活性的抑制作用研究

2.1 引言

2.2 材料与方法

2.3 结果和分析

2.4 结论与讨论

2.5 本章小结

第三章 复合载体固定脂肪酶及其性质的研究

3.1 引言

3.2 实验部分

3.3 结果与讨论

3.4 本章小结

第四章 固定化酶亲和色谱筛选中药中脂肪酶抑制剂

4.1 引言

4.2 实验部分

4.3 结果与讨论

4.4 本章小结

结语

参考文献

附录 攻读学位期间发表的相关论文

致谢