脂肪酶的固定化及其抑制剂筛选方法的研究

摘要

存在于人体消化系统中的脂肪酶能够将食物中的脂肪水解成脂肪酸和甘油单酯，甘油单酯和脂肪酸被人体吸收后能重新合成脂肪。过量脂肪的堆积，最终导致肥胖。脂肪酶抑制剂可以通过抑制脂肪酶的活性，达到减肥的目的。目前已上市的脂肪酶抑制剂—奥利司他对肥胖症有较好的疗效，但是也会产生一些副作用。因此，为了研究开发出副作用小、安全性高，更符合肥胖患者需求的脂肪酶抑制剂，有必要建立快速、简单、高效的脂肪酶抑制剂活性检测及筛选方法。
　　 本论文主要研究工作如下：
　　 1.建立了气相色谱检测脂肪酶及其抑制剂体外活性的方法。应用该方法对具有减肥功效的中药提取物进行脂肪酶抑制活性的初步筛选，筛选出了3种具有脂肪酶抑制作用的中药。
　　 2.以化学共价的方法，成功将脂肪酶固定到两种具不同功能基团的硅胶上。结果显示，通过载体上硫代磺酸基团与酶分子中的巯基键合得到的固定化酶LsH的活力比通过醛基载体与酶分子中的氨基结合得到的固定化酶LGAL活力高了将近一倍。通过原子力显微镜观察到，LsH与LGAL相比，具有较粗糙的表面结构特征，为底物成功进入酶的活性中心提供了良好的通道。脂肪酶被固定化后，酶活pH范围和热稳定性都比溶液酶有所增加。并且固定化脂肪酶具有良好的重复利用率和贮存稳定性。
　　 3.以固定化脂肪酶为亲和介质，利用酶与抑制剂之间的亲和作用，建立了脂肪酶抑制剂的活性筛选方法。并用已知的脂肪酶抑制剂—赛利司他和黄芩苷为阳性对照，验证了该方法的可行性，得出了亲和容量与酶活力之间的关系。用该方法，成功从中药黄芩中筛选出了具有脂肪酶抑制作用的成分，并进行了简单的结构鉴定。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章绪论

1.1引言

1.2脂肪酶与肥胖

1.3脂肪酶抑制剂的研究进展

1.4论文选题的意义和主要内容

第二章气相色谱法测定脂肪酶及其抑制剂的体外活性

2.1引言

2.2实验部分

2.3结果与讨论

2.4小结

第三章不同功能化硅胶固定化脂肪酶及其性质的研究

3.1引言

3.2实验部分

3.3结果与讨论

3.4小结

第四章固定化酶-抑制剂亲和作用法筛选脂肪酶抑制剂

4.1引言

4.2实验部分

4.3结果与讨论

4.4小结

结语

参考文献

附录一：攻读学位期间发表的相关论文

致谢