人类脑胶质瘤的生物学治疗

摘要

目的 脑胶质瘤是中枢神经系统常见肿瘤，虽然脑胶质瘤的治疗在手术、放疗及化疗方面取得了显著的进步，但其预后还是不容乐观，寻求更有效的治疗方法成为脑胶质瘤治疗迫切需要解决的问题。随着分子生物学、免疫学和细胞生物学等领域的快速发展，生物学治疗已成为胶质瘤治疗的新模式，主要有基因治疗和免疫治疗两种方法。本研究建立体外稳定培养扩增树突状细胞的方法。开展脑胶质瘤自体树突状细胞肿瘤疫苗临床试验研究，临床随访并观察患者免疫学指标的变化。作为脑胶质瘤免疫基因治疗的前临床探索，本研究探讨建立人类骨髓基质干细胞的体外培养扩增的稳定方法，对其形态学作初步观察。 方法 人体外周血经梯度离心分离获得单个核细胞，于含10％自体血清的RPMI1640培养液中培养，加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和白细胞介素-4(rhIL-4)诱导分化。培养过程中相差显微镜观察细胞形态变化，7～10天收集树突状细胞，进行超微结构的电镜观察，流式细胞术测定其表面HLA-DA的表达。 将脑胶质瘤患者切除新鲜肿瘤组织冻融，超声粉碎，提取上清，制备胶质瘤抗原。体外培养自体树突状细胞，并以自体肿瘤抗原冲击致敏树突状细胞，制各自体树突状细胞肿瘤疫苗。试验组21例脑胶质瘤患者接受自体树突状细胞免疫治疗，对照组19例接受常规治疗，进行临床随访并检测两组T细胞亚群水平的变化。 梯度离心法得到人骨髓单个核细胞，在含20％胎牛血清的DMEM/F12培养基中贴壁培养，原代培养至第10～12天细胞汇合成层时，进行传代培养，相差显微镜观察细胞形态变化。透射电镜观察骨髓基质干细胞的超微结构，流式细胞术测定其细胞增殖状态。 结论 人类外周血来源的单个核细胞在体外培养中联合运用细胞因子GM-CSF和IL-4后可诱导、扩增出大量树突状细胞，可满足临床脑胶质瘤自体树突状细胞免疫治疗的需要。 脑胶质瘤存在免疫功能抑制，自体树突状细胞肿瘤疫苗治疗可一定程度重建、增强肿瘤抗原提呈，激活肿瘤特异性杀伤细胞，并刺激机体产生非特异性抗肿瘤免疫反应，抑制肿瘤生长，显著延长患者术后生存时间。临床试验证明免疫治疗安全有效，有待深入研究。 骨髓基质干细胞是脑胶质瘤基因免疫治疗的理想载体。体内的骨髓基质干细胞可在离体条件下进行梯度离心分离纯化和体外扩增，并能够稳定传代6～10代，细胞数量充足，基本满足脑胶质瘤基因免疫治疗载体细胞的需求。

目录

前 言

第一部分人类外周血来源树突状细胞的体外培养

第二部分人类脑胶质瘤自体树突状细胞肿瘤疫苗的临床应用及观察

第三部分人类骨髓基质干细胞体外培养及初步观察

全文结论

综述一脑肿瘤的免疫学和免疫治疗

综述二细胞介导的免疫治疗：恶性胶质瘤治疗的新途径

缩略语词表

致谢