zeste基因增强子同源物2对胃癌细胞衰老的影响及调控机制

摘要

第一部分抑制EZH2表达对阿霉素诱导的胃癌细胞衰老的影响及相关机制
　　目的：
　　检测阿霉素对胃癌细胞系的衰老诱导作用，及抑制EZH2表达对该作用的影响，并探讨相关机制。
　　方法：
　　使用阿霉素诱导AGS和MKN28两种胃癌细胞系衰老，采用SA-β-gal染色、DAPI染色、流式周期检测方法检测衰老诱导效果。观察siRNA或特异性EZH2抑制剂EGCG联合阿霉素的作用对胃癌细胞的影响。使用Western-blot检测p53/p21通路活化程度。
　　结果：
　　阿霉素能够有效诱导AGS和MKN28两种胃癌细胞系衰老，从而抑制胃癌细胞增殖。沉默EZH2能够促进阿霉素对细胞的增殖抑制作用，但就其机制而言，p53野生型与突变型细胞涉及的机制不同。对p53突变型胃癌细胞MKN28，抑制EZH2在诱导衰老及促进凋亡两方面均与阿霉素存在协同作用，但对于 p53野生型胃癌细胞系AGS无此协同作用。
　　结论：
　　实验结果表明阿霉素能够促进胃癌细胞衰老。并揭示了EZH2与阿霉素联合使用对胃癌细胞衰老和凋亡进程的影响与细胞p53背景密切相关。
　　第二部分抑制EZH2表达对胃癌细胞系的衰老诱导机制
　　目的：
　　研究抑制EZH2表达对胃癌细胞系MKN28、SGC-7901中INK4/ARF位点的影响，从而探索衰老诱导机制。
　　方法：
　　采用MTT、细胞增殖实验及克隆形成实验检测shRNA-EZH2通过抑制EZH2表达对胃癌细胞增殖的影响。SA-β-gal染色、流式周期检测方法检测细胞衰老情况。通过Western blot及ChIP验证抑制EZH2表达对胃癌细胞系MKN28、SGC-7901中INK4/ARF位点的影响，从而探索衰老诱导机制。
　　结果：
　　shRNA-EZH2能够有效抑制EZH2及其下游产物H3K27me3的表达，并能抑制对胃癌细胞的增殖及克隆形成能力。对于 p21、p16均不表达的 MKN28细胞系，抑制p15表达能够阻碍shRNA-EZH2的衰老诱导作用。最后，通过Western blot及ChIP验证EZH2可通过表观遗传学途径影响INK4/ARF位点的转录，从而调控周期影响衰老。
　　结论：
　　揭示了EZH2在调控INK4/ARF位点表达及诱导胃癌细胞衰老中的重要作用，为以原癌基因EZH2为靶点的肿瘤治疗策略的应用奠定了一定理论基础。

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前言

参考文献

第一部分 抑制EZH2表达对阿霉素诱导的胃癌细胞衰老的影响及相关机制

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 抑制EZH2表达对胃癌细胞系的衰老诱导机制

材料与方法

结果

讨论

参考文献

全文小结

综述:诱导细胞衰老与肿瘤治疗

附录:在校攻读学位期间发表论文

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