鸟苷延迟给药对缺血性脑卒中的治疗作用及相关机制研究

摘要

第一部分鸟苷延迟给药对缺血性脑卒中梗死体积和行为学的影响
　　目的:多个离体和在体研究已经表明鸟苷对急性缺血性脑卒中具有神经保护作用，但延迟给药（脑卒中后24h给药）对脑卒中功能恢复的影响尚未有人研究。本研究利用光化学脑梗死模型，在脑卒中后24h给药，研究鸟苷对脑梗死体积和行为学的影响。
　　方法:16只C57/B6J小鼠随机分为两组，建立光化学脑梗死模型，于建模后24h分别予以腹腔注射鸟苷（8mg/kg）和生理盐水，并连续给药7天，每天一次。分别于建模前1天和建模后第1,3,7,14,28天行行为学检测，包括改良神经严重性量表（mNSS）评分、转棒试验、Corner试验和Cylinder试验等。另取8只C57/B6J小鼠，亦随机分为鸟苷治疗组和生理盐水两组，建立光化学脑梗死模型，于建模后第7天时断头取脑，行尼氏染色，测定脑梗死体积。
　　结果:两组小鼠在建模前均无明显神经功能缺损，差异无统计学意义。建模后一天，两组均表现出明显的神经功能障碍，差异无统计学意义。两组在建模后第3天到第28天，神经功能缺损均表现出逐渐的恢复，但在第3、7天无统计学差异，于第14天开始与对照组相比，鸟苷可促进神经功能的恢复。两组在梗死后第7天时的梗死体积无明显统计学差异。
　　结论:鸟苷延迟给药不影响缺血性脑卒中急性期的梗死体积和行为学表现，但可促进卒中后的长期功能恢复。
　　第二部分鸟苷延迟给药促进脑梗死后的神经再生和血管生成
　　目的：研究鸟苷延迟给药是否可以促进缺血性脑卒中后小鼠的神经再生、血管生成及神经营养因子BDNF、VEGF的表达。
　　方法：C57B6/J小鼠在行光化学脑梗死造模后随机分为两组，治疗组在造模24小时后予以腹腔注射鸟苷（8mg/kg），连续7天，对照组给予等体积生理盐水。分别于造模7天、14天及28天后处死动物，免疫荧光染色定量侧脑室室管膜下区和海马齿状回颗粒下区 BrdU及 BrdU/DCX双标阳性细胞数目，梗死周边区BrdU/NeuN双标阳性细胞数、微血管密度及 BrdU/vWF双标阳性细胞数。行Western Blot检测卒中7天、14天及28天后缺血侧大脑皮质内BDNF和VEGF的蛋白表达量。
　　结果：鸟苷延迟给药显著增加卒中后7天、14天及28天时室管膜下区和颗粒下区 BrdU阳性及 BrdU/DCX双标阳性细胞数，增加14天及28天时梗死周边BrdU/NeuN双标阳性细胞数、微血管密度及BrdU/vWF双标阳性细胞数。同时，Western Blot显示，鸟苷治疗组卒中后7天、14天和28天时BDNF及7天、14天时VEGF蛋白表达较对照组显著增加。
　　结论：鸟苷延迟给药可促进缺血性脑卒中后神经再生及血管生成，增加 BDNF和VEGF的表达，从而改善卒中后长期神经功能。
　　第三部分鸟苷延迟给药对缺血性脑卒中后胶质细胞活化的调节作用
　　目的：缺血性脑卒中后伴随着星形胶质细胞增生、胶质瘢痕的形成和小胶质细胞激活、炎症反应启动和维持，同时这些病理生理过程也是脑卒中药物作用的靶点。小胶质细胞在卒中后存在两种活化状态（M1和M2），分别具有加重神经损伤和促进组织修复的作用。在本部分我们研究卒中后鸟苷延迟给药是否影响星形胶质细胞、小胶质细胞的激活来发挥神经修复作用。
　　方法：建立光化学脑梗死小鼠模型，卒中后24小时后予以鸟苷治疗（每天8mg/kg），持续7天。脑梗死造模28天后处死小鼠，应用免疫荧光方法对星形胶质细胞（GFAP染色阳性）、小胶质细胞（Iba-1阳性）进行计数。缺血侧大脑皮质行荧光定量PCR，检测脑内相关炎症因子和细胞因子的mRNA表达量。
　　结果：与对照组相比，鸟苷治疗组梗死后28天时SVZ区GFAP阳性细胞数增多，但梗死周边区GFAP阳性细胞数及Iba-1阳性细胞数均降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。鸟苷治疗显著降低缺血侧大脑皮质M1标志物iNOS、CD16、IL-1β、CD32的mRNA水平，而升高 M2标志物 CD206、IL-10、Arg1、Ym1的mRNA水平。
　　结论：鸟苷延迟给药可抑制缺血性卒中后梗死周边的星形胶质反应和小胶质细胞活化，并调节小胶质细胞的替代性活化，使其趋向M2极化，从而可能改善神经功能。

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前言

参考文献

第一部分 鸟苷延迟给药对缺血性脑卒中梗死体积和行为学的影响

中文摘要

Abstract

1. 引言

2. 材料和方法

3 结果

4 讨论

参考文献

第二部分 鸟苷延迟给药促进脑梗死后的神经再生和血管生成

中文摘要

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1 引言

2 材料和方法

3 结果

4 讨论

参考文献

第三部分 鸟苷延迟给药对缺血性脑卒中后胶质细胞活化的调节作用

中文摘要

Abstract

1 引言

2 材料和方法

3 结果

4 讨论

参考文献

全文总结

综述一: 鸟嘌呤核苷对神经系统疾病的治疗作用

综述二: 神经重塑对卒中后神经修复的意义

附录一 常用缩略语

附录二 攻读学位期间发表的SCI论文

致谢