慢性间歇缺氧诱导小鼠海马损伤的神经炎症机制及药物干预的研究

摘要

1.拮抗P2X7受体改善慢性间歇缺氧小鼠海马损伤、认知受损的研究
　　目的：睡眠呼吸暂停综合征可引起患者认知障碍，但其具体机制尚不清楚。慢性间歇缺氧是睡眠呼吸暂停最重要的特征，此缺氧模型常用于对睡眠呼吸暂停综合症的研究。P2X7受体是一种常见于多种神经系统疾病的嘌呤受体，在脑组织中广泛表达。本实验拟研究P2X7受体在慢性间歇缺氧导致的神经损伤中的作用及其可能的通路。
　　方法：实验使用8周龄C57BL/6小鼠。为探究P2X7受体表达的变化，每个时间点（第3,7,14,21天）采用8只小鼠，随机分为缺氧组（氧浓度21％~6%，40循环/小时，一天8小时）和常氧组（氧浓度21%，其余条件一致）2组。使用蛋白质印迹法和实时定量荧光PCR检测P2X7受体。之后在为期21天的BBG（P2X7受体拮抗剂）实验中，采用48只小鼠，随机分为慢性间歇缺氧+生理盐水组，慢性缺氧+BBG组，常氧+生理盐水组，常氧+BBG组4组。使用Morris水迷宫实验检测小鼠的认知功能。使用蛋白质印迹法检测NFκB和NOX2水平。使用实时定量荧光PCR测量肿瘤坏死因子α（TNF-α），白介素-1β(IL-1β)，IL-18，IL-6的水平。使用相应试剂盒检测丙二醛和超氧化物歧化酶水平。用苏木精-伊红染色法和TUNEL染色法检测神经细胞损伤和凋亡。
　　结果：实验中发现P2X7受体mRNA于间歇缺氧3天后开始增高，持续到21天，P2X7受体蛋白水平于间歇缺氧第7天开始增高持续到21天。在BBG实验中，慢性间歇缺氧小鼠在Morris水迷宫的表现差于其他组小鼠，表现为潜伏期更长，在平台的穿越次数更少，目标象限停留时间更少。BBG处理后认知功能改善。慢性间歇小鼠中NFκB和NOX2升高，使用BBG后其水平下降。慢性间歇小鼠中TNF-α，IL-1β，IL-18，IL-6的水平均高于正常组。BBG处理CIH组炎症因子的水平下降。慢性间歇小鼠中氧化应激水平均高于正常组。BBG可使MDA下降，SOD增高。慢性间歇缺氧小鼠的海马神经细胞出现细胞肿胀，核聚缩等细胞退化，细胞凋亡的改变,BBG使细胞受损改善。
　　结论：拮抗P2X7受体可以改善间歇缺氧导致的神经炎症、氧化应激、神经损害和空间认知能力损伤，提示P2X7受体可能为睡眠呼吸暂停综合征所致认知缺损的新靶点，为今后药物的研究提供更多的选择。
　　2.阿托伐他汀对慢性间歇缺氧小鼠海马损伤及Toll样受体4信号通路影响的研究
　　目的：海马神经损伤为睡眠呼吸暂停导致的认知损害的重要原因。阿托伐他汀是一种广泛使用的降脂药物，有文献报导其能改善认知损伤。TLR4受体是一种参与天然免疫的Toll受体，近期发现其在阿尔茨海默病等多种神经疾病中发挥作用。本实验拟研究阿托伐他汀是否能改善慢性间歇缺氧所致小鼠海马神经细胞损伤，以及 TLR4及其下游通路是否参与其中。
　　方法：实验使用40只8周龄C57BL/6小鼠。小鼠随机分为慢性间歇缺氧（氧浓度21%-6%，40循环/小时，一天8小时）组，慢性间歇缺氧+阿托伐他汀组，常氧组，常氧+阿托伐他汀组4组。使用蛋白质印迹法和实时定量荧光PCR检测TLR4受体及其下游通路蛋白MYD88和TRIF。使用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肿瘤坏死因子α（TNF-α），白介素-1β(IL-β)。使用相应试剂盒检测丙二醛和超氧化物歧化酶水平。使用用苏木精-伊红染色法和TUNEL染色法检测神经细胞损伤和凋亡。
　　结果：慢性间歇小鼠中TLR4受体，MYD88和TRIF水平升高，阿托伐他汀的使用降低TLR4受体及下游通路蛋白的表达。慢性间歇缺氧海马和血清中TNF-α，IL-1β水平均高于正常组，阿托伐他汀处理使炎症因子水平下降。慢性间歇小鼠中氧化应激水平高于正常组。阿托伐他汀可使SOD增高，MDA下降。慢性间歇缺氧小鼠的海马神经细胞出现细胞肿胀，核聚缩等细胞退化的改变，神经细胞凋亡增加，阿托伐他汀使细胞受损改善。
　　结论：阿托伐他汀可以改善慢性间歇缺氧所致海马神经损伤，其作用可能涉及TLR4/MYD88和TLR4/TRIF通路。
　　3.邻香草醛对慢性间歇缺氧小鼠海马损伤及TOLL样受体2信号通路影响的研究
　　目的：海马神经损伤为睡眠呼吸暂停导致认知损害的主要原因。TLR2受体是一种在脑缺血等多种神经疾病中发挥重要作用的I型受体，在OSAS患者中表达亦有增高。邻香草醛为新近发现的TLR2通路抑制剂，且具有抗氧化等作用。本实验拟研究邻香草醛是否能通过抑制TLR2通路改善慢性间歇缺氧所致小鼠海马神经细胞损伤。
　　方法：实验使用40只8周龄C57BL/6小鼠。小鼠随机分为慢性间歇缺氧（氧浓度21%-6%，40循环/小时，一天8小时）组，慢性间歇缺氧+邻香草醛组，常氧组，常氧+邻香草醛组4组。使用免疫共沉淀和蛋白质印迹法检测TLR2受体与其下游通路蛋白MYD88相互作用，使用蛋白质印迹法检测NFκB激活状态。使用酶联免疫吸附测定法检（ELISA）测肿瘤坏死因子α（TNF-α），白介素-1β(IL-β)。使用相应试剂盒检测丙二醛和超氧化物歧化酶水平。使用用免疫组织化学方法检测小胶质细胞的表达，使用TUNEL染色法检测细胞凋亡。
　　结果：慢性间歇小鼠中 TLR2/MYD88通路被激活，邻香草醛的使用抑制 TLR2通路激活及下游NFkB的表达。慢性间歇缺氧海马和血清中TNF-α，IL-1β水平均高于正常组，邻香草醛的处理使炎症因子水平下降。慢性间歇小鼠中氧化应激水平高于正常组。邻香草醛可使MDA下降，SOD增高。慢性间歇缺氧小鼠的海马小胶质细胞聚集增加，活化程度较高，神经细胞出现细胞肿胀，核聚缩等细胞退化的改变，神经细胞凋亡增加，邻香草醛可以减少小胶质细胞的聚集，减轻神经细胞凋亡。
　　结论：邻香草醛可以改善慢性间歇缺氧所致海马神经损伤，其作用涉及TLR2/MYD88通路。

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全文中主要缩略词中英文对照表

前言

参考文献

1. 拮抗P2X7受体改善慢性间歇缺氧小鼠海马损伤、认知受损的研究

1.1摘要(中文)

1.1摘要（英文）

1.2关键词

1.3引言

1.4材料和方法

1.5实验结果

1.6讨论

1.7创新点

1.8参考文献

2.阿托伐他汀对慢性间歇缺氧小鼠海马损伤及Toll样受体4信号通路影响的研究

2.1中文摘要

2.1英文摘要

2.2关键词

2.3前言

2.4材料和方法

2.5实验结果

2.6结论

2.7创新点

2.8参考文献

3.邻香草醛对慢性间歇缺氧小鼠海马损伤及TOLL样受体2信号通路影响的研究

3.1摘要(中文)

3.1摘要（英文）

3.2关键词

3.3引言

3.4材料和方法

3.5实验结果

3.6讨论

3.7创新点

3.8参考文献

4.综述：神经炎症在阻塞性睡眠呼吸暂停综合征脑损伤中的作用

附录：攻读学位期间发表论文目录

致谢