MicroRNA-200b通过靶向DNMT3A及DNMT3B在肾细胞癌中调控MEG3表达

摘要

目的：长链非编码RNA MEG3在多种肿瘤中被证实具有肿瘤抑制功能，但其在肾细胞癌中的表达、功能及调控机制仍不明确。本研究目的为探讨 MEG3及 miR-200b在肾细胞癌组织及相应细胞系中的表达程度和生物学功能；阐明miR-200b调控MEG3表达水平的分子学机制。
　　方法：通过基因芯片、生物信息学及实时定量PCR检测MEG3及miR-200b在肾癌组织及细胞系中的表达水平及表达相关性；利用甲基化特异性PCR、MassARRAY平台及去甲基化药物处理从而检测 MEG3甲基化水平；应用 MTS、集落形成试验、EdU插入实验、Transwell迁移侵袭实验来探究MEG3和miR-200b在肾癌细胞系中的功能；通过荧光素酶报告基因系统以及western blot验证miR-200b的可能靶基因，并探讨靶基因是否可以影响DNA甲基化而影响MEG3表达。
　　结果：MEG3及miR-200b在肾细胞癌组织及细胞系中均为显著低表达，且组织中两者表达量呈正相关。肾细胞癌组织中 MEG3启动子区域呈高甲基化水平。细胞功能试验显示MEG3和miR-200b表达水平上调均可抑制肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力。试验还证实DNMT3A及DNMT3B是miR-200b的直接靶基因，且干扰 DNMT3A及 DNMT3B可使 MEG3启动子区域甲基化水平下调，并使MEG3表达量增加。
　　结论：肾细胞癌中MEG3及miR-200b表达水平均下降且正相关，两者可抑制肾癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。miR-200b能够通过靶向DNMT3A及DNMT3B影响MEG3启动子甲基化水平，从而调控MEG3的表达量。

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1 绪言

2 材料与方法

2.1实验材料

2.2 主要实验方法

2.3 统计学分析

3 结果

3.1 肾癌细胞系及肾癌组织中MEG3低表达且启动子区域高甲基化

3.2 肾癌组织及细胞系中miR-200b显著低表达并与MEG3表达水平正相关

3.3 MEG3与miR-200b在肾癌中均发挥肿瘤抑制功能

3.4 miR-200b通过靶向DNMT3A、DNMT3B调节MEG3表达

4 讨论

参考文献

附录 硕士期间发表的文章

综述: 从表观遗传学视角看miRNA在肿瘤中的作用

致谢