BNIP3对顺铂介导的卵巢癌细胞凋亡的影响

摘要

目的：
　　BNIP3是Bcl-2家族中BH3-only亚家族的成员，属于促凋亡蛋白，主要表达于线粒体，BNIP3主要通过线粒体途径诱导细胞凋亡和介导细胞自噬。已有基础研究证实BNIP3在抗代谢类化疗药物所介导的DNA损伤后错配修复过程中促进细胞自噬，从而调控化疗反应性。但是 BNIP3在卵巢癌铂类耐药中的作用还有待研究。本课题拟在此基础上研究BNIP3在铂类诱导卵巢癌细胞凋亡过程中的作用。
　　方法：
　　1、用 qRT-PCR和 WB的方法在转录和蛋白水平检测卵巢癌细胞株 A2780、SKOV3、OV2008、OVCAR4、HO8910、ES2中BNIP3的表达情况。
　　2、MTT实验检测给予不同浓度的顺铂处理细胞株48小时后，各卵巢癌细胞株的IC50。
　　3、qRT-PCR和WB的方法验证，瞬转了BNIP3的小干扰RNA（siRNA）后BNIP3的表达。
　　4、MTT与克隆形成实验比较下调 BNIP3后，卵巢癌细胞株对顺铂的敏感性的变化。
　　5、下调BNIP3后，给予顺铂处理48小时，WB用来检测卵巢癌细胞株凋亡相关蛋白cleaved caspase3，PARP cleavage的表达情况及自噬标记物LC3的表达情况。
　　6、下调BNIP3后，给予顺铂处理48小时，流式细胞学检测A2780细胞株的凋亡情况。
　　结果：
　　1、BNIP3在6种卵巢癌细胞株中均有表达。BNIP3在OVCAR4、A2780、HO8910中高表达。
　　2、顺铂对A2780、SKOV3、OV2008、OVCAR4、HO8910、ES2的半数致死量（IC50）分别为3.103μM,26.24μM,18.14μM,12.63μM,12.57μM,6.403μM。其中A2780、OVCAR4、ES2对顺铂更敏感。
　　3、在卵巢癌细胞株A2780、OVCAR4中转染BNIP3的siRNA，72小时后检测BNIP3在转录和蛋白水平明显下调。
　　4、下调BNIP3后，给予顺铂处理细胞48小时，MTT和克隆形成实验检测A2780、OVCAR4细胞株对顺铂的敏感性降低。
　　5、下调BNIP3后，给予顺铂处理48小时，WB检测卵巢癌细胞株A2780、OVCAR4的cleaved caspase3，cleaved PARP表达降低。自噬相关标记物LC3表达降低。
　　6、下调BNIP3后，给予顺铂处理48小时，流式细胞学检测卵巢癌细胞株A2780的凋亡率降低。
　　结论：
　　BNIP3能促进铂类介导的卵巢癌细胞的凋亡。

目录

声明

中英文缩略词表

前言

材料和方法

一、实验材料

二、实验方法

三、 统计分析

实验结果

一、卵巢癌细胞株中BNIP3的表达水平与细胞对顺铂敏感性

二、构建BNIP3-siRNA，干扰BNIP3的表达

三、下调BNIP3能降低卵巢癌细胞株A2780、OVCAR4对顺铂的敏感性

四、A2780、OVCAR4细胞中BNIP3的下调导致顺铂介导的凋亡减少

五、下调A2780细胞株中BNIP3的表达导致自噬减少

讨论

参考文献

综述：BNIP3在细胞凋亡和自噬中的调控作用

附录

致谢