microRNAs诱导成纤维细胞转分化为少突胶质前体细胞的实验研究

摘要

目的：探索借助成熟的microRNAs诱导大鼠皮肤成纤维细胞转分化为少突胶质前体细胞(OPCs)的实验方法。
　　方法：分离培养新生24h内的SD大鼠皮肤成纤维细胞，光镜观察细胞形态，进一步行免疫荧光实验鉴定成纤维细胞。然后以lipo2000作为microRNAs模拟物mimics的载体，将筛选后的miR-219和miR-338的mimics转染至成纤维细胞，在OPCs诱导培养基中培养。在转染后的2d，4d，6d，8d，10d，12d光镜下观察细胞形态学改变，免疫荧光实验检测OPCs特异性标志物O4、A2B5、Olig2，OLs特异性标志物MBP等的表达，提取RNA做RT-qPCR，分析比较OPCs标志基因的表达。
　　结果：成纤维细胞转染microRNAs后4天，开始由扁平梭状变为网格状聚集的细胞，胞体周围出现突起。免疫荧光结果显示OPCs的特异性标志物Olig2、O4为阳性， A2B5阴性。转然后第2d，4d，6d，8d，12d后的RT-qPCR结果示：成纤维细胞的特异性标志物Fibronectin表达增强，OPCs早期阶段的标志物Olig2、MAG、MOG等表达先增高后下降。阴性对照和空白对照组未检测到OPCs标志物表达。
　　结论：在miR-219，miR-338及相关诱导培养基的作用下，可将大鼠成纤维细胞转分化为具有部分OPCs特性的类OPCs。

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