microRNAs介导成纤维细胞转分化为神经元的实验研究

摘要

目的:探索借助成熟microRNAs重编程大鼠成纤维细胞(fibroblasts)为神经元的转分化的实验方法。
　　方法:取新生大鼠皮肤原代成纤维细胞体外培养并扩增,经差速贴壁纯化、免疫荧光鉴定后,以第三代成纤维细胞为重编程对象,以lip2000为micoRNAs的投送载体,将筛选后的microRNAs(miR-9/9*,miR-124,miR-128)的模拟物mimics转染成纤维细胞,并行qPCR检测转染前后成纤维细胞内目标microRNAs的变化,于转染后的1周,2周,3周,4周进行免疫荧光观察,检测神经元前体细胞标记物Pax6及神经元特异性标记物MAP2、βⅢtubulin、NF200的表达。
　　结果:成纤维细胞转染microRNAs后1-4周,Pax6免疫荧光检测均阴性;在转染后2周,成纤维细胞形态发生类似神经元改变,免疫荧光检测结果显示神经元特异性标记物MAP2(阳性率约10％),βⅢtubulin(阳性率约50%)、NF200(阳性率约60%)均阳性。
　　结论:借助成熟microRNAs可将大鼠成纤维细胞高效的重编程为神经元样细胞。

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绪言

1.材料与方法

1.1实验所用动物

1.2 试剂及材料

1.3 成纤维细胞的培养及鉴定

1.4 成纤维细胞及大鼠脑组织RNA提取

1.5 microRNA筛选

1.6 成纤维细胞重编程及转分化细胞鉴定

1.7 实验分组

1.8 统计学分析

2. 检测指标

3. 结 果

3.1成纤维细胞生物形态学分析及鉴定

3.2 Lip2000转染成纤维细胞效率

3.3 实时荧光定量PCR结果

3.4 转分化细胞鉴定

4. 讨论

5. 结论

参考文献

综述

参 考 文 献

附录1（攻读学位期间发表论文目录）

致谢