艾拉莫德通过抑制破骨细胞与脂肪细胞分化缓解卵巢切除所致骨质流失

摘要

实验目的：
　　1.观察口服艾拉莫德后卵巢切除模型小鼠骨质及其他组织的变化。
　　2.建立体外破骨细胞分化模型与脂肪细胞分化模型，探索艾拉莫德对破骨细胞形成及脂肪细胞形成的影响及其机制。
　　实验方法：
　　1.建立卵巢切除动物模型，观察艾拉莫德对骨质流失的影响
　　切除小鼠两侧卵巢，并给予口服艾拉莫德(每日30 mg/kg)或安慰剂。6周后分离小鼠股骨远端，使用μ-CT扫描评估骨质形态学变化，使用 H&E染色观察骨髓内骨小梁变化与脂肪组织含量，使用TRAP染色评估破骨细胞活性，最后检测血清CTX-I含量。
　　2.体外实验检测艾拉莫德对破骨细胞形成与功能的影响
　　分离小鼠骨髓单核巨噬细胞，使用RANKL与M-CSF诱导破骨细胞分化。同时给予艾拉莫德处理，以TRAP染色、骨板吸收实验检测艾拉莫德对破骨细胞形成与功能的影响。随后以Western blot检测RANKL刺激后骨髓单核巨噬细胞内PPAR-γ、c-Fos、NFATc1以及破骨细胞标志性蛋白的表达。最后以PPAR-γ激动剂罗格列酮确认艾拉莫德对PPAR-γ/c-Fos通路的影响。
　　3.体外实验检测艾拉莫德对脂肪细胞形成的影响
　　分离大鼠骨髓间充质干细胞，以脂肪诱导分化培养基诱导脂肪细胞形成。同时给予艾拉莫德处理，以油红 O染色检测艾拉莫德对脂肪细胞形成的影响。以 qRT-PCR检测脂肪细胞内脂联素（adiponectin）、以及脂肪素（adipsin）的表达。最后检测艾拉莫德对PPAR-γ表达的影响。
　　实验结果：
　　1、予以卵巢切除手术并完成6周给药后，艾拉莫德处理组小鼠比安慰剂组小鼠股骨远端骨质流失程度减轻，同时脂肪组织含量明显减少。TRAP染色显示艾拉莫德明显抑制了卵巢切除手术引发的破骨细胞激活。ELISA结果也显示艾拉莫德处理组小鼠血清CTX-I水平明显低于安慰剂组小鼠。
　　2. TRAP染色与骨板吸收实验显示，艾拉莫德能够有效抑制破骨细胞的形成及其溶骨功能。同时艾拉莫德也能够抑制破骨细胞内肌动蛋白环的形成。Western blot结果显示艾拉莫德能够抑制RANKL刺激所激活的PPAR-γ、c-Fos与NFATc1表达，并下调了破骨细胞功能相关蛋白cathepsin K、MMP-9和TRAP的水平。此外，PPAR-γ的激动剂罗格列酮能够部分削弱艾拉莫德对破骨细胞分化的抑制作用。
　　3.油红 O染色显示，艾拉莫德能够有效抑制间充质干细胞向脂肪细胞分化。同时艾拉莫德能够有效抑制关键性转录因子PPAR-γ的表达，进而减少脂肪细胞特征性基因adiponectin与adipsin的表达。
　　实验结论：
　　1.艾拉莫德能够有效减轻卵巢切除小鼠的骨质流失。
　　2.艾拉莫德抑制了小鼠骨髓单核巨噬细胞内RANKL诱导的PPAR-γ/c-Fos通路激活，进而影响下游破骨细胞关键转录因子和功能蛋白的表达，最终影响破骨细胞的形成与功能。
　　3.艾拉莫德能够通过抑制PPAR-γ的表达影响间充质干细胞向脂肪细胞分化。

目录

声明

英文缩略词表

第一部分 艾拉莫德抑制卵巢切除造成的骨质疏松

引言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

引言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

引言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

全文总结

一、研究主要结论

二、研究创新点

三、研究的不足与展望

综述:骨质疏松的病因与治疗的相关研究

附录1：攻读学位期间发表的论文

致谢