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前言
1材料和方法
1.1.1 主要实验仪器
1.1.2 主要实验试剂
1.2.1 PBDE-47试剂贮备液的配制
1.2.2磷酸缓冲盐溶液（PBS）的配制
1.2.3 30%丙烯酰胺/0.8%亚甲基双丙烯酰胺（Acry:Bis）的配制
1.2.4 1.5 mol/L 4× Tris·HCl/SDS溶液（pH=8.8）的配制
1.2.5 0.5 mol/L 4× Tris·HCl/SDS溶液（pH=6.8）的配制
1.2.6 10%过硫酸铵（AP）的配制
1.2.7 1×电泳缓冲液的配制
1.2.8 1×转膜缓冲液的配制
1.2.9 1×TBST缓冲液的配制
1.2.9 5%封闭液的配制
1.3 细胞培养
1.4 细胞染毒
1.5 过表达TFEB腺病毒
1.6.1细胞的收集
1.6.2 蛋白的提取和定量
1.6.3 BCA蛋白定量
1.6.4 电泳
1.6.5 转膜
1.6.6 封闭
1.6.7 孵育一抗
1.6.8 孵育二抗
1.6.9 显影
1.7.1爬片
1.7.2 转染Ad-mCherry-GFP-LC3B
1.7.3 染毒PBDE-47
1.7.4 封片
1.7.5 检测
1.8 荧光显微镜检测
1.8.1 细胞爬片
1.8.2 细胞染毒
1.8.3 Lysotracker Red工作液的配制
1.8.4 溶酶体的荧光标记
1.8.5 拍片
1.9 溶酶体的提取
1.10 qPCR检测mRNA表达水平
1.10.1 RNA的提取
1.10.2 测定RNA的浓度
1.10.3 逆转录
1.10.4 PCR荧光扩增
1.11 细胞存活率实验
1.12 统计学分析
2结果
2.1 PBDE-47对溶酶体膜通透性的影响
2.2 PBDE-47对溶酶体pH的影响
2.3 PBDE-47对PC12细胞溶酶体相关蛋白的影响
2.4 PBDE-47对PC12细胞自噬体与溶酶体融合的影响
2.5 PBDE-47对PC12细胞自噬体与溶酶体融合关键蛋白表达水平的影响
2.6 PBDE-47对PC12细胞TFEB表达水平的影响
2.7 TFEB过表达对PBDE-47致PC12细胞自噬体与溶酶体融合关键蛋白表达水平的影响
2.8 TFEB过表达对PBDE-47致PC12细胞溶酶体相关蛋白的影响
2.9 TFEB过表达对暴露于PBDE-47的PC12细胞溶酶体pH值的影响
2.10 TFEB过表达对暴露于PBDE-47的PC12细胞自噬相关蛋白的影响
2.11 TFEB过表达对暴露于PBDE-47的PC12细胞存活率的影响
3讨论
4结论
参考文献
综述:TFEB在神经退行性疾病中作用的研究进展
附录
致谢
