p-STAT3/SOCS1蛋白在原发性干燥综合征患者唇腺组织中的表达及意义

摘要

干燥综合征（Sjogren’s syndrome，SS）是一种较为常见的自身免疫性疾病，主要侵犯外分泌腺，尤以泪腺和唾液腺受累为主。以口干、眼干为主要临床表现，但亦可出现多系统功能损害，严重者可危及患者生命。但其发病机制尚不清楚。目前认为T、B淋巴细胞的异常活化发挥着重要作用。已有研究显示，用决定Tfh细胞功能的细胞因子IL-21刺激系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞后，其p-STAT3和SOCS1的表达水平随之发生变化。也有研究显示，在类风湿关节炎大鼠的滑膜中p-STAT3的表达水平是升高的。说明p-STAT3在自身免疫性疾病中发挥作用，且p-STAT3参与的CIS的表达对SOCS1的表达是极其重要的。p-STAT3和SOCS1二者在唇腺组织T淋巴细胞活化以及唇腺上皮细胞凋亡中的作用尚少有研究报道。
　　目的：
　　本研究通过收集临床确诊为原发性干燥综合征患者唇腺组织，采用免疫荧光法和Western Blot方法分别检测不同病理等级唇腺组织中的p-STAT3、SOCS1的表达水平，比较Ⅰ、Ⅱ级和Ⅲ、Ⅳ级组中两种蛋白的表达差异，再进一步观察病理改变为Ⅲ级组和Ⅳ级组之间这两种蛋白表达的差异，并探讨其与CD4+T细胞的关系，用以证实p-STAT3/SOCS1信号通路是否通过诱导T细胞的活化对干燥综合征的发病及疾病发展产生影响，旨在为未来干燥综合征的治疗提供新的干预靶点。
　　方法：
　　1首先应用单标免疫荧光和Western blot法分别检测Ⅲ、Ⅳ级组和Ⅰ、Ⅱ级组唇腺组织中p-STAT3、SOCS1阳性细胞表达率和蛋白相对表达量。再应用双标免疫荧光检测Ⅲ、Ⅳ级组和Ⅰ、Ⅱ级组唇腺组织中CD4+T细胞的表达中p-STAT3、SOCS1的表达位置并计数阳性患者个体数。
　　2统计学处理：采用SPSS21.0统计软件进行统计学分析，Ⅲ、Ⅳ级组与Ⅰ、Ⅱ级组中的阳性个体数的比较采用Fisher确切概率法进行检验，以P<0.05为有统计学意义。Ⅲ级组、Ⅳ级组之间淋巴细胞灶中的阳性细胞率的差异的比较采用秩和检验，以P<0.05为有统计学意义。
　　结果：
　　1免疫荧光单标检测p-STAT3、SOCS1在唇腺组织中的表达
　　免疫荧光法单标结果显示，干燥综合征Ⅲ、Ⅳ级组唇腺组织淋巴细胞灶中可见较多的p-STAT3绿色荧光颗粒，而Ⅰ、Ⅱ级组仅有极少量的绿色荧光颗粒表达。同时，Ⅲ、Ⅳ级组唇腺组织淋巴细胞灶中也可见较多的SOCS1绿色荧光颗粒，而Ⅰ、Ⅱ级组仅有极少量的绿色荧光颗粒表达。另外，发现在唇腺导管上皮细胞中也可见有p-STAT3、SOCS1的绿色荧光表达。
　　2 Western blot检测p-STAT3、SOCS1在唇腺组织中的表达
　　Western blot分析显示，与Ⅰ、Ⅱ级组（0.083±0.063）相比，Ⅲ、Ⅳ级组唇腺组织中p-STAT3蛋白表达水平升高，且Ⅳ级唇腺组织中p-STAT3的表达量（2.777±0.117）高于Ⅲ级病变组织（1.089±0.001），经统计学分析两组之间的的表达有明显差异（P＜0.05）。同时，SOCS1蛋白的表达水平也高于Ⅰ、Ⅱ级组（0.033±0.002），Ⅳ级病变组织（1.233±0.051）的表达量高于Ⅲ级病变组织（0.506±0.011），经统计学分析两组之间的的表达有明显差异（P＜0.05）。
　　3免疫荧光单标检测CD4+T细胞在唇腺组织中的表达
　　免疫荧光法单标结果显示，在干燥综合征Ⅲ、Ⅳ级组唇腺组织淋巴细胞灶中可见大量CD4+红色荧光颗粒，而在Ⅰ、Ⅱ级组唇腺组织中极少有该红色荧光颗粒的表达。
　　4免疫荧光双标检测CD4+T细胞中p-STAT3、SOCS1的表达
　　CD4/p-STAT3双标免疫荧光结果显示，在干燥综合征Ⅲ、Ⅳ级组唇腺组织淋巴细胞灶中CD4+T淋巴细胞中可见p-STAT3的表达，且Ⅳ级患者病变组织中的CD4+p-STAT3+T淋巴细胞的阳性率高于Ⅲ级组，经统计学分析两组之间的的表达无明显差异（Z=-0.645，P=0.519）。CD4/SOCS1双标免疫荧光结果显示，在干燥综合征Ⅲ、Ⅳ级组唇腺组织淋巴细胞灶中CD4+T淋巴细胞中可见SOCS1的表达，且Ⅳ级患者病变组织中的CD4+SOCS1+T淋巴细胞的表达高于Ⅲ级组，经统计学分析两组之间的的表达无明显差异（Z=-0.645，P=0.519）。
　　结论：p-STAT3/SOCS1蛋白可能通过激活CD4+T细胞诱导干燥综合征的唇腺组织损伤，其是否加速疾病进展并与唇腺组织病变的严重程度相关有待进一步证实。

目录

声明

英文缩写

前言

材料与方法

1研究对象及分组

2研究方法

3统计学处理

结果

1免疫荧光单标检测p-STAT3、SOCS1在唇腺组织中的表达

2 Western blot检测p-STAT3、SOCS1在唇腺组织中的表达

3免疫荧光单标检测CD4+T细胞在唇腺组织中的表达

4免疫荧光双标检测CD4+T细胞中p-STAT3、SOCS1的表达

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述:JAK/STAT信号通路在结缔组织病中的研究进展

致谢

个人简历