慢性乙型肝炎患者黑色素瘤缺乏因子-2水平变化及其临床意义

摘要

目的：
　　乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）是人类嗜肝病毒属中重要的一员，慢性HBV感染可以导致慢性乙型病毒性肝炎（chronic hepatitis B, CHB），肝硬化和肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）。导致肝脏损伤的原因不是HBV复制直接破坏肝细胞。目前大多数的观点认为机体免疫调控的紊乱是导致慢性肝损伤的主要原因，然而对固有免疫在慢乙肝肝脏损伤中的作用的认识尚不清楚。胞质双链DNA感应蛋白黑色素瘤缺乏因子-2（absent in melanoma-2, AIM2）是一种主要定位于细胞质的蛋白质。AIM2可与胞质内双链DNA（double-stranded DNA, dsDNA）结合，并且连接适配器分子凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD, ASC），形成炎症小体，激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1, CASP-1），继而引起成熟的白细胞介素1β（interleukin1β, IL-1β）和白细胞介素18（interleukin, IL-18）产生。本研究主要通过观察AIM2是否在慢性乙型肝炎患者肝脏组织中表达，并且检测AIM2 mRNA在肝组织和外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）中的水平变化，初步探讨HBV是否可通过激活AIM2-ASC-Caspase-1途径，释放炎性因子，导致肝细胞损伤，从固有免疫角度分析慢性乙型病毒性肝炎肝脏炎症损伤的发病机制。
　　方法：
　　自2015年6月至2016年12月从河北医科大学第三医院感染科门诊及住院患者随机选取CHB患者30例，HBV相关慢加急性肝衰竭（acute-on-chronic liver failure, ACLF）患者23例，征集同期于本医院健康体检者20例作为健康对照，收集所有观察对象晨起空腹外周血血清。同时收集接受肝组织穿刺术的CHB患者肝组织标本21例，接受肝移植术的HBV相关ACLF患者肝组织标本19例，以及健康供肝肝组织5例。所纳入患者入组前6个月均未曾接受免疫调节、抗病毒及乙肝疫苗治疗。CHB诊断符合中华医学会肝病学分会、中华医学会感染病学分会制定的《慢性乙型肝炎防治指南（2015版）》，HBV相关ACLF诊断符合中华医学会感染病学分会肝衰竭与人工肝学组、中华医学会肝病学分会重型肝病与人工肝学组共同制定的《肝衰竭诊疗指南（2012年版）》。收集各组研究对象常规生化学指标，如白蛋白（albumin, ALB）、丙氨酸氨基转移酶（alanine transaminase, ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate transaminase, AST）、总胆红素（total bilirubin, TB）、直接胆红素（direct bilirubin, DB）等，检测CHB患者及HBV相关ACLF患者血清HBV DNA载量、乙型肝炎病毒表面抗原（Hepatitis B Virus Surface Antigen, HBsAg）及乙型肝炎病毒e抗原（Hepatitis B Virus e Antigen, HBeAg）水平。应用免疫组织化学方法检测CHB患者及HBV相关ACLF患者肝组织中AIM2表达，并采用实时荧光定量PCR检测肝组织和外周血单个核细胞中AIM2 mRNA表达水平。
　　结果：
　　1各组研究对象的人口学及临床资料
　　各组研究对象年龄及性别比例均具有可比性。CHB组患者血清ALB、HBV DNA、HBsAg、HBeAg水平明显高于HBV相关ACLF组（P<0.05）， TB、DB、INR水平均显著低于HBV相关ACLF组（P<0.01），CHB组与HBV相关ACLF组间血清ALT、AST水平无明显差异（P>0.05）。各组人口学指标及临床资料详见Table1。
　　2慢性乙型病毒性肝炎组患者PBMC中AIM2表达增加
　　应用实时荧光定量PCR检测73名研究对象PBMC内AIM2 mRNA水平。AIM2 mRNA在正常对照组相对表达量设定为1.00。CHB组患者PBMC内AIM2 mRNA水平（4.426±5.395）明显高于HBV相关ACLF组（2.077±1.291）及健康对照组（1.00±0.00）（P均<0.01）。HBV相关ACLF组患者PBMC内AIM2 mRNA水平明显高于健康对照组（P<0.01）。各组PBMC内AIM2 mRNA表达水平详见Fig.1。
　　3慢性乙型病毒性肝炎组患者肝组织中AIM2表达增加
　　应用实时荧光定量PCR检测45名研究对象肝组织内AIM2 mRNA水平。AIM2 mRNA在正常对照组相对表达量设定为1.00。CHB组患者肝组织内AIM2 mRNA水平（3.231±2.005）明显高于HBV相关ACLF组（1.598±0.662）及健康对照组（1.00±0.00）（P均<0.01）。HBV相关ACLF组患者肝组织内AIM2 mRNA水平明显高于健康对照组（P<0.01）。各组肝组织内AIM2 mRNA表达水平详见Fig.2。应用免疫组织化学法检测肝组织中AIM2的表达和分布。AIM2阳性表达主要分布在肝细胞胞质内，显微镜下呈棕黄色颗粒状。AIM2在正常肝组织几乎不表达，CHB组患者肝组织中AIM2表达较HBV相关ACLF组显著增加。各组肝组织内AIM2表达和分布详见Fig.3(A)-(C)。
　　4慢性乙型病毒性肝炎组患者PBMC中AIM2 mRNA表达水平与血清ALT、AST、HBV DNA、HBsAg、HBeAg的相关性分析
　　CHB组患者PBMC AIM2 mRNA水平与血清ALT、AST水平均呈正相关（r=0.575,0.563, P均<0.01）。CHB组患者PBMC AIM2 mRNA水平与血清HBV DNA、HBsAg、HBeAg水平均呈负相关（r=-0.663,-0.622,-0.431, P均<0.01）。CHB组患者PBMC AIM2 mRNA水平与临床指标相关性分析详见Fig.4(A)-(E)。
　　结论：
　　1慢性乙型病毒性肝炎患者肝组织和PBMC中AIM2均较HBV相关慢加急性肝衰竭患者表达增多，可能与慢乙肝较强的AIM2相关固有免疫应答有关。
　　2肝细胞胞质中HBV DNA可能通过激活AIM2的表达，促进炎症小体形成，诱导固有免疫反应，推测AIM2可能在慢性乙型病毒性肝炎肝脏炎症损伤机制中发挥重要作用。

目录

声明

英文缩写

前言

材料与方法

1 主要仪器

2 主要试剂

3 方法

4 统计学处理

结果

3 慢性乙型病毒性肝炎组患者肝组织中AIM2表达增加

4 慢性乙型病毒性肝炎组患者PBMC中AIM2 mRNA表达水平与血清ALT、AST、HBV DNA、HBsAg、HBeAg的相关性分析

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述:黑色素瘤缺乏因子-2与肝脏疾病

致谢

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