17β雌二醇对丙泊酚致发育期大鼠海马神经细胞凋亡及远期学习记忆功能障碍的影响及机制研究

摘要

第一部分：17β雌二醇对丙泊酚致发育期大鼠海马神经细胞凋亡的影响
　　目的：评价17β雌二醇能否通过ERK信号通路改善丙泊酚导致的发育期大鼠海马神经细胞凋亡。
　　方法：7日龄健康雄性SD大鼠78只，体重11~18g，按照随机数字表法分为6组（n=13）：二甲基亚砜组（DMSO组），脂肪乳剂组（F组），17β雌二醇组（E组），丙泊酚组（P组），丙泊酚+17β雌二醇组（PE组），丙泊酚+17β雌二醇+U0126组（PEU组）。E组皮下注射600μg/kg17β雌二醇，DMSO组皮下注射与之等容量的DMSO，P组腹腔注射75 mg/kg丙泊酚，F组腹腔注射与之等容量脂肪乳剂，PE组腹腔注射75 mg/kg丙泊酚，皮下注射600μg/kg17β雌二醇，PEU组腹腔注射75 mg/kg丙泊酚，皮下注射600μg/kg17β雌二醇并腹腔注射10 mg/kg U0126。六组大鼠均每24 h注射一次，连续注射7 d。在整个麻醉过程当中，将所有大鼠置于保温箱中（26~28℃），严密观察大鼠呼吸频率及皮肤黏膜颜色变化，并持续低流量给氧（2 L/min）。待大鼠翻正反射恢复后，一同放回笼中（幼鼠与母鼠分离时间不超过5 h）。在末次注射结束后第15 min，每组随机取3只大鼠，行动脉血气分析检测其PaO2水平。在末次给药结束后24 h时，每组随机取5只大鼠，采用免疫组化法检测其海马组织中活化的caspase3蛋白水平；另取每组5只大鼠，采用Western blot法检测其海马组织中pERK蛋白水平。
　　结果：
　　1.血气分析结果显示：六组大鼠动脉血中PaO2正常且组间比较差异无统计学差异（P＞0.05）。
　　2.免疫组化结果显示：DMSO组与E组海马组织中活化的caspase3蛋白水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；与F组比较，P组海马组织中活化的caspase3蛋白表达上调（P＜0.05）；与P组比较，PE组海马组织中活化的caspase3蛋白表达下调（P＜0.05）；与PE组比较，PEU组海马组织中活化的caspase3蛋白表达上调（P＜0.05）。
　　3.Western blot结果显示：DMSO组与E组海马组织中pERK蛋白水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；与F组比较，P组海马组织中pERK蛋白表达下调（P＜0.05）；与P组比较，PE组海马组织中pERK蛋白表达上调（P＜0.05）；与PE组比较，PEU组海马组织中pERK蛋白表达下调（P＜0.05）。
　　结论：17β雌二醇可通过激活ERK信号通路改善丙泊酚导致的发育期大鼠海马神经细胞凋亡。
　　第二部分：17β雌二醇对丙泊酚致发育期大鼠远期学习记忆功能障碍的影响
　　目的：评价17β雌二醇对丙泊酚致发育期大鼠远期学习记忆功能障碍的影响及其机制。
　　方法：7日龄雄性SD大鼠72只，体重11~18g，按照随机数字表法分为6组（n=12）：二甲基亚砜组（DMSO组），脂肪乳剂组（F组），17β雌二醇组（E组），丙泊酚组（P组），丙泊酚+17β雌二醇组（PE组），丙泊酚+17β雌二醇+U0126组（PEU组）。E组皮下注射600μg/kg17β雌二醇，DMSO组皮下注射与之等容量的DMSO，P组腹腔注射75 mg/kg丙泊酚，F组腹腔注射与之等容量脂肪乳剂，PE组腹腔注射75 mg/kg丙泊酚，皮下注射600μg/kg17β雌二醇，PEU组腹腔注射75 mg/kg丙泊酚，皮下注射600μg/kg17β雌二醇并腹腔注射10 mg/kg U0126。六组大鼠均每24 h注射一次，连续注射7 d。在整个麻醉过程当中，所有大鼠置于保温箱中（26~28℃），严密观察大鼠呼吸频率及皮肤黏膜颜色变化，并持续低流量给氧（2 L/min）。待大鼠翻正反射恢复后一同放回笼中（幼鼠与母鼠分离时间不超过5 h）。在末次注射结束后第15 min，每组随机取3只大鼠，行动脉血气分析检测其PaO2水平。其余大鼠继续饲养至60日龄，采用Morris水迷宫检测各组大鼠学习记忆功能。Morris水迷宫测试结束后，每组随机取5只大鼠，分别采用紫外比色法与ELISA法检测其海马组织中谷氨酸（Glutamate， Glu）与γ氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）水平，并计算Glu/GABA比值。
　　结果：
　　1.血气分析结果显示：六组大鼠动脉血中PaO2水平正常且组间比较差异无统计学差异（P＞0.05）。
　　2.Morris水迷宫结果显示：定位航行实验中，DMSO组与E组大鼠同一天逃避潜伏期比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；与F组比较， P组大鼠第3~5天逃避潜伏期延长（P＜0.05）；与P组比较，PE组大鼠第3~5天逃避潜伏期缩短（P＜0.05）；与PE组比较，PEU组大鼠第4~5天逃避潜伏期延长（P＜0.05）。空间探索实验中，DMSO组与E组大鼠穿越平台次数及靶象限停留时间百分比比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；与F组比较，P组大鼠穿越平台次数及靶象限停留时间百分比减少（P＜0.05）；与P组比较，PE组大鼠穿越平台次数及靶象限停留时间百分比增加（P＜0.05）；与PE组比较，PEU组大鼠穿越平台次数及靶象限停留时间百分比减少（P＜0.05）。
　　3.紫外比色与ELISA结果显示：六组大鼠海马组织中GABA水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；DMSO组与E组Glu水平及Glu/GABA比值比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；与F组比较，P组Glu水平下降，Glu/GABA比值减小（P＜0.05）；与P组比较，PE组Glu水平增加，Glu/GABA比值增大（P＜0.05）；PE组与PEU组Glu水平及Glu/GABA比值比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　结论：17β雌二醇可改善丙泊酚导致的发育期大鼠远期学习记忆功能障碍，其机制可能与提高海马Glu/GABA比值有关。

目录

声明

英文缩写

引言

第一部分17β雌二醇对丙泊酚致发育期大鼠海马神经细胞凋亡的影响

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分17β雌二醇对丙泊酚致发育期大鼠远期学习记忆功能障碍的影响

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述:丙泊酚对发育期大脑影响的研究进展

致谢

个人简历