microRNA-301b、microRNA-376a在结直肠癌中的表达及其临床意义

摘要

目的：本研究以结直肠癌患者的肿瘤组织和与其对应的上切缘无瘤粘膜组织为标本，检测microRNA-301b（miR-301b）和microRNA-376a（miR-376a）在肿瘤组织和与其对应的上切缘无瘤粘膜组织中的表达，并分析其与结直肠癌临床病理特征之间的关系。
　　方法：
　　1收集2015年1月到2016年1月在唐山工人医院普外科行结直肠癌手术患者的新鲜癌组织标本28例，同时选取对应的上切缘无瘤粘膜组织28例，离体后迅速置于液氮，存于-80℃冰箱备用；
　　2提取组织总RNA，验证RNA的完整性之后将其反转录成c-DNA,应用实时定量PCR的方法，检测miR-301b和miR-376a肿瘤组织和与其对应的上切缘无瘤粘膜组织中的表达情况；
　　3分析miR-301b和miR-376a的相对表达水平与患者的性别、年龄、部位、浸润深度、分化程度、组织学类型、淋巴结转移、远处转移、肿瘤标志物（CEA、CA199、CA724）之间的关系；
　　4使用GraphPad Prism5软件进行统计学分析，由于部分数据呈非正态分布，所以所有数据均以中位数（四分位数间距）表示，配对数据采用Wilcoxon检验方法，非配对数据采用Manny-Whitney检验方法，结果以P<0.05具有统计学意义。
　　结果：
　　1 miR-301b在结直肠癌组织中表达分析
　　以无瘤组织样本检测的CT值为对照，利用2-ΔΔCt的方法计算miR-301b在结直肠癌组织和上切缘无瘤粘膜组织中的相对表达水平，结果显示，miR-301b在结直肠癌组织和上切缘无瘤粘膜组织中的相对表达水平的中位数分别为6.564和0.9353（P=0.0061），四分位数间距分别为（1.261，29.86）和（0.6053，3.180）；与上切缘无瘤粘膜组织比较，结直肠癌组织中miR-301b表达显著上调，结果具有统计学差异。
　　2 miR-301b与结直肠癌组织临床病理特征之间的关系分析
　　利用2-ΔΔCt的方法计算出miR-301b在结直肠癌组织和上切缘无瘤粘膜组织中的相对表达水平后，将每个独立样本结直肠癌组织的Fc值除以对应的上切缘无瘤粘膜组织的Fc值，得出的结果即为每个样本的miR-301b相对表达量。结果显示，miR-301b在中高分化和低分化结直肠癌组织中的相对表达量中位数分别为1.383和57.31（P=0.0115），四分位数间距分别为（1.022，11.45）和（43.44，126.9），在无远处转移和发生远处转移的患者中的相对表达量分别为1.248和12.43（P=0.0159），四分位数间距分别为（0.6004，17.34）和（4.771，120.3），在CA724小于5和大于等于5的患者中相对表达量分别为1.392和126.9（P=0.0142），四分位数间距分别为（1.056，14.89）和（42.46，146.3），结果具有统计学差异。
　　3 miR-376a在结直肠癌组织中表达分析
　　以无瘤组织样本检测的CT值为对照，利用2-ΔΔCt的方法计算miR-376a在结直肠癌组织和上切缘无瘤粘膜组织中的相对表达水平，结果显示，miR-376a在结直肠癌组织和上切缘无瘤粘膜组织中的相对表达水平中位数分别为1.685和1.164（P=0.0153），四分位数间距分别为（1.079，2.332）和（0.326，1.966）；与上切缘无瘤粘膜组织比较，结直肠癌组织中miR-376a表达显著下调，结果具有统计学差异。
　　4 miR-376a与结直肠癌组织临床病理特征之间的的关系分析
　　利用2-ΔΔCt的方法计算出miR-376a在结直肠癌组织和上切缘无瘤粘膜组织中的相对表达水平后，将每个独立样本结直肠癌组织的Fc值除以对应的上切缘无瘤粘膜组织的Fc值，得出的结果即为每个样本的miR-376a相对表达量。结果显示，miR-376a在无淋巴结转移和有淋巴结转移患者中的相对表达量的中位数分别为1.248和0.586（P=0.0232），四分位数间距分别为（0.717，2.025）和（0.184，0.915），在无远处转移和有远处转移的患者中相对表达量的中位数分别为1.070和0.522（P=0.0486），四分位数间距分别为（0.527，1.727）和0.522（0.192，0.689），在CEA小于20和大于等于20的患者中相对表达量分别为1.032和0.464（P=0.0404），四分位数间距分别为（0.773，1.715）和（0.188，0.571），结果具有统计学差异。
　　结论：
　　1 miR-301b可能作为促癌因子在结直肠癌中发挥促进肿瘤生成的作用，并促进了结直肠癌的恶性侵袭性生物学行为的发生。
　　2 miR-376a可能作为抑癌因子在结直肠癌中发挥抑制肿瘤生成的作用，并抑制了结直肠癌的侵袭、转移过程。

目录

声明

英文缩写

前言

材料与方法

1 材料

2 实验方法

结果

2 miR-301b在结直肠癌组织和切缘无瘤粘膜组织中的表达

3 miR-376a在结直肠癌组织和切缘无瘤粘膜组织中的表达

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述:结直肠癌与MicroRNA研究进展

致谢

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