不同时机艾灸对寒湿凝滞型痛经大鼠子宫组织微血管密度及血管活性物质含量的影响

摘要

目的：观察不同时机艾灸干预对寒湿凝滞型原发性痛经（PD）大鼠行为学、子宫组织微血管密度（MVD）、子宫组织前列腺素F2α（PGF2α）、前列腺素E2（PGE2）、加压素（AVP）、一氧化氮（NO）、内皮素（ET-1）含量以及血浆血栓素B2（TXB2）、6-酮-前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）含量的影响，以探讨其对寒湿凝滞型原发性痛经模型大鼠止痛效应影响的差异性及其可能的作用机制。以期为临床选择最佳时机的艾灸介入治疗寒湿凝滞型原发性痛经提供可靠的实验依据。
　　方法：将60只Wistar雌性大鼠适应性喂养7 d后，采用阴道涂片法，筛选出处于动情间期大鼠45只，并将其随机分为对照组（Control）、模型组（Model）、预先灸组（Pre-Mox）、即刻灸组（Im-Mox）和预先即刻灸组（P&I-Mox）（每组9只）。对照组于大鼠股部给予皮下注射生理盐水，1次/d，连续10 d（第1 d、10 d注射0.5 mL/只，第2~9 d0.2 mL/只）。其余4组大鼠均采用（0±1）℃冰水浴结合苯甲酸雌二醇注射法制备寒湿凝滞型痛经模型，将大鼠后肢及下腹部浸入（0±1）℃冰水混合物中（室温23±2℃）进行寒冷刺激，1次/d，20 min/次，同时给予大鼠股部皮下注射苯甲酸雌二醇，1次/d，连续10 d（第1 d、10 d注射0.5 mg/只，第2~9 d0.2 mg/只）。预先灸组于造模期间第8 d开始治疗，第10 d结束治疗，共3 d；即刻灸组于造模第11 d注射完缩宫素后（即痛经模型复制成功后）开始治疗，共1d；预先即刻灸组于造模期间第8d开始治疗，第11 d结束治疗，共4 d。3个艾灸组均采用直径为7 mm粗细的艾条，于神阙、关元穴处同时施温和灸，10 min/穴，1次/d。对照组、模型组均采用与艾灸组相同的体位固定，10 min/次，1次/d。除对照组外，其余4组寒湿凝滞型PD模型大鼠模型均注射缩宫素后观察其行为学反应，待行为学检测结束后，将大鼠断头取血后，于冰盘上迅速分离出“Y”字形子宫左侧子宫组织，以冷藏的生理盐水洗净拭干称重，加入生理盐水碾磨，制成30％的子宫组织匀浆，于低温4℃时3000 rpm离心15 min，取上清液，用放射免疫分析法检测大鼠子宫组织PGE2、AVP、ET-1含量，酶联免疫法检测大鼠子宫组织PGF2α含量，生物化学技术检测大鼠子宫组织NO含量。右侧子宫组织用浓度为4%的多聚甲醛溶液进行固定，石蜡包埋、切片，一部分采用免疫组化法检测子宫组织MVD，剩余部分用于HE染色，于光镜下观察各组大鼠子宫组织MVD和子宫组织细胞的形态学改变。
　　结果：
　　1.不同时机艾灸对寒湿凝滞型PD大鼠行为学的影响:扭体行为学观察结果显示：艾灸干预后，预先灸组、即刻灸组、预先即刻灸组痛经大鼠的潜伏期均明显延长、扭体次数减少、扭体总分降低，与模型组比较，差异均有统计学意义；3个艾灸组相比，即刻灸组、预先即刻灸组较预先灸组痛经大鼠的扭体次数及扭体总分均明显减少和降低，预先即刻灸组较预先灸组痛经大鼠的潜伏期明显延长；预先即刻灸组与即刻灸组比较，预先即刻灸组较即刻灸组痛经大鼠的潜伏期明显延长、扭体次数及扭体总分均明显减少和降低。
　　2.不同时机艾灸对寒湿凝滞型PD大鼠子宫组织细胞病理形态学的影响:子宫组织HE染色后，置于光镜下，一般形态学观察显示：对照组大鼠子宫组织形态规则，无水肿，大量中性粒细胞；模型组大鼠子宫组织形态较规则，组织严重水肿，充血，大量中性粒细胞和淋巴细胞；预先灸组、即刻灸组、预先即刻灸组大鼠子宫组织均形态规则，组织轻度水肿，无充血，大量中性粒细胞，少量淋巴细胞。
　　3.不同时机艾灸对寒湿凝滞型PD大鼠子宫组织MVD值的影响:模型组大鼠子宫组织MVD明显减少，与对照组比较，差异有统计学意义；预先灸组、即刻灸组、预先即刻灸组与模型组比较，3个艾灸组痛经大鼠子宫组织MVD均明显增多，差异有统计学意义；预先即刻灸组与预先灸组比较，预先即刻灸组较预先灸组MVD明显增多；即刻灸组与预先灸组比较，即刻灸组较预先灸组MVD虽有数值差异，但无统计学差异。预先即刻灸组与即刻灸组比较，预先即刻灸组较即刻灸组虽有数值差异，但无统计学差异。
　　4.不同时机艾灸对寒湿凝滞型PD大鼠血浆TXB2和6-keto-PGF1α含量的影响:模型组痛经大鼠血浆TXB2含量及TXB2/6-keto-PGF1α比值均明显升高、6-keto-PGF1α含量明显降低，与对照组相比，差异均有统计学意义；艾灸干预后，预先灸组、即刻灸组、预先即刻灸组痛经大鼠血浆TXB2含量及TXB2/6-keto-PGF1α比值均明显降低、6-keto-PGF1α含量明显升高，与模型组相比，差异均有统计学意义；预先即刻灸组与预先灸组比较，预先即刻灸组较预先灸组痛经大鼠血浆TXB2含量及TXB2/6-keto-PGF1α比值均明显降低，6-keto-PGF1α含量明显升高；即刻灸组与预先灸组比较，即刻灸组较预先灸组血浆TXB2、6-keto-PGF1α含量及TXB2/6-keto-PGF1α比值虽有数值差异，但无统计学意义；预先即刻灸组与即刻灸组比较，预先即刻灸组较即刻灸组痛经大鼠血浆 TXB2含量及 TXB2/6-keto-PGF1α比值均明显降低、6-keto-PGF1α含量明显升高。
　　5.不同时机艾灸对寒湿凝滞型PD大鼠子宫组织PGF2α、PGE2含量及PGF2α/PGE2比值的影响：模型组痛经大鼠子宫组织PGF2α的含量及PGF2α/PGE2比值均明显升高，PGE2的含量明显降低，与对照组比较，差异均有统计学意义。艾灸干预后，预先灸组、即刻灸组、预先即刻灸组痛经大鼠子宫组织PGF2α的含量及PGF2α/PGE2比值均明显降低、PGE2含量明显升高，与模型组相比，差异均有统计学意义。预先即刻灸组与预先灸组比较，预先即刻灸组较预先灸组子宫组织PGF2α的含量及PGF2α/PGE2比值均明显降低，PGE2的含量明显升高。即刻灸组与预先灸组比较，即刻灸组较预先灸组 PGF2α的含量及PGF2α/PGE2比值均明显降低，PGE2含量明显升高。预先即刻灸组与即刻灸组比较，预先即刻灸组较刻灸组痛经大鼠子宫组织PGF2α的含量及PGF2α/PGE2比值均明显降低，PGE2的含量明显升高。
　　6。不同时机艾灸对寒湿凝滞型PD大鼠子宫组织AVP含量的影响：模型组痛经大鼠子宫组织AVP的含量明显升高，与对照组比较，差异有统计学意义。艾灸干预后，预先灸组、即刻灸组、预先即刻灸组3个艾灸组痛经大鼠子宫组织AVP含量均明显降低，与模型组比较，差异有统计学意义。预先即刻灸组、即刻灸组、预先灸组3组两两比较，3组子宫组织AVP含量虽各有数值差异，但无统计学意义。
　　7.不同时机艾灸对寒湿凝滞型PD大鼠子宫组织ET-1、NO含量的影响:模型组痛经大鼠子宫组织ET-1的含量明显升高，NO的含量明显降低，与对照组比较，差异均有统计学意义。艾灸干预后，预先灸组、即刻灸组、预先即刻灸组痛经大鼠子宫组织ET-1的含量明显降低、NO含量明显升高，与模型组相比，差异均有统计学意义。预先即刻灸组与预先灸组比较，预先即刻灸组较预先灸组子宫组织ET-1的含量明显降低、NO的含量明显升高。即刻灸组与预先灸组比较，即刻灸组较预先灸组ET-1的含量明显降低、NO含量明显升高。预先即刻灸组与即刻灸组比较，预先即刻灸组较刻灸组痛经大鼠子宫组织ET-1的含量明显降低、NO的含量明显升高。
　　结论：
　　1.预先灸、即刻灸及预先即刻灸的不同时机介入均可明显减轻寒湿凝滞型PD大鼠腹部收缩及扭体反应，明显延长其潜伏期，但其效果尤以预先即刻灸最为明显，即刻灸次之。说明不同时机艾灸对寒湿凝滞型PD模型大鼠均有良好的镇痛效果，但预先即刻灸的效果更加显著。
　　2.三种不同时机艾灸均可改善寒湿凝滞型PD模型大鼠子宫组织充血、水肿状态。但预先灸、即刻灸及预先即刻灸3组之间对大鼠子宫组织病理形态学改变无明显差异。
　　3.三种不同时机艾灸均可增加寒湿凝滞型PD模型大鼠子宫组织MVD，有效改善子宫局部微循环。但其中尤以预先即刻灸组效果最佳，明显优于预先灸和即刻灸。其作用可能是通过艾火的温通、经络的传热及神经的传递对子宫产生的热效应，以增加血流量，改变局部血液循环，进而达到缓解疼痛之目的。
　　4.三种不同时机艾灸均可降低寒湿凝滞型PD模型大鼠血浆TXB2含量及TXB2/6-keto-PGF1α比值；升高6-keto-PGF1α的含量，其中尤以预先即刻灸最为明显。说明不同时机艾灸对上述各项指标水平均有良好的调节作用，但预先即刻灸的调节作用更加显著。其作用机制可能是通过调节血小板活性和血管张力，改善血管收缩状态，使子宫局部血流量增加，而达到止痛之目的。
　　5.三种不同时机艾灸均可降低寒湿凝滞型PD模型大鼠子宫组织PGF2α含量及PGF2α/PGE2比值；提高PGE2的水平，但其作用尤以预先即刻灸最为明显，即刻灸次之。说明不同时机艾灸对PGF2α和PGE2的异常水平均有良好的调节作用，且预先即刻灸的调节作用更加显著，其作用机制可能是通过恢复PGF2α和PGE2的平衡，改善机体内分泌环境，进而抑制子宫平滑肌及血管痉挛性收缩，改善局部的缺血缺氧状态，从而起到镇痛作用。
　　6.三种不同时机艾灸均可明显降低寒湿凝滞型PD模型大鼠子宫组织AVP含量，且三者之间无明显差异。其作用机制可能是通过降低AVP含量，进一步减少PG合成与释放，从而有效抑制子宫平滑肌痉挛性收缩，改善局部血液循环，增加血流量，缓解缺血状态，从而发挥其镇痛之效应。
　　7.三种不同时机艾灸均可降低ET-1含量、升高NO含量，其中预先即刻灸最为明显，即刻灸次之。说明不同时机艾灸均可调节子宫组织ET-1和NO的失衡状态，且预先即刻灸的调节作用更加显著。其作用机制可能是通过舒张子宫血管平滑肌，抑制其收缩，改善子宫组织微循环，增加其血流量，以达到缓解疼痛之目的。

目录

声明

英文缩写

前言

材料与方法

1 材料

2 方法

结果

1 各组大鼠一般状态观察

2 动情间期大鼠筛选情况

3 行为学观察

4 子宫组织细胞病理形态学观察

5 不同时机艾灸对PD模型大鼠子宫组织微血管密度的影响

6 不同时机艾灸对PD模型大鼠血浆TXB2、6-keto-PGF1α含量的影响

7 不同时机艾灸对 PD 模型大鼠子宫组织 PGF2α、PGE2含量及PGF2α/PGE2比值的影响

8 不同时机艾灸对PD模型大鼠子宫组织AVP含量的影响

9 不同时机艾灸对PD模型大鼠子宫组织ET-1、NO含量的影响

附图

附表

讨论

1 现代医学对原发性痛经的认识

2 祖国医学对原发性痛经的认识

3 寒湿凝滞型原发性痛经动物模型制备

4 选穴依据

5 艾灸神阙、关元穴治疗原发性痛经的作用机理

6 艾灸介入时机分析

7 不同时机艾灸神阙、关元穴对寒湿凝滞型原发性痛经大鼠行为学的影响

8 不同时机艾灸神阙、关元穴对寒湿凝滞型原发性痛经大鼠子宫组织病理形态学影响

9 不同时机艾灸神阙、关元穴对寒湿凝滞型原发性痛经大鼠子宫组织微血管密度的影响

10 不同时机艾灸干预对寒湿凝滞型PD大鼠的血浆及子宫组织血管活性物质含量的影响

结论

参考文献

综述:近十年针灸对原发性痛经动物模型干预的实验研究进展

致谢

个人简历