机械牵张力与晚期糖基化终末产物协同促进小鼠血管平滑肌细胞MAPKs激活的研究

摘要

目的：
　　 用机械牵张力(Strech stress)和/或晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products，AGEs)刺激体外培养的小鼠动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)，研究机械牵拉力和/或晚期糖基化终末产物对VSMCs生物学行为的影响及其分子机制，探讨高血压与糖尿病协同促进血管重构(vascular remodeling，VR)发生的机制。
　　 实验方法：
　　 (1)体外分离小鼠主动脉中膜，组织块贴壁法原代培养VSMCs，并进行形态学和生物化学鉴定(分别用光镜、电镜和Westernblot等方法)。
　　 (2)将BSA和葡萄糖按一定比例溶解在磷酸缓冲液中，进行透析后孵育，获得AGE-BSA；用琼脂糖凝胶电泳和荧光光度法鉴定糖基化的AGE-BSA和BSA。
　　 (3)用不同浓度或时间点的AGEs作用于VSMCs，用Western blot的方法检测MAPKs的激活；
　　 (4)用不同强度或作用时间的机械牵张力作用于VSMCs，用Western blot的方法检测MAPKs的激活；
　　 (5)用AGEs和机械牵张力共同作用于VSMCs，用Westernblot的方法检测MAPKs的激活。
　　 结果：
　　 (1)7天左右有细胞从组织块中长出，14天铺满培养瓶。细胞呈长梭型和谷峰样的外观，细胞表达平滑肌特异抗原α-actin(SM-α-actin)。
　　 (2)孵育8w后，获得的AGE-BSA呈棕色，BSA呈透明；经电泳分离后，用考马斯亮蓝染色，显示AGE-BSA对应的条带分子量大于BSA，迁移率相对的较BSA慢；经荧光光度法鉴定，可见用370nm单光入射激发AGE-BSA后，可见其在440～450nm处呈现峰值，其荧光强度是BSA的6-13倍。
　　 (3)Western blot显示：机械牵拉力和AGEs均可以导致血管平滑肌细胞细胞内MAPKs的磷酸化，而AGEs与机械牵张力共存时细胞内MAPKs的磷酸化水平更高。
　　 结论：
　　 机械牵张力和AGEs可以分别促进VSMCsMAPKs的磷酸化，且两者同时作用于VSMCs时可发挥明显的协同促进作用。本研究结果可望为高血压伴随糖尿病引起血管重构机制的研究提供有用的实验室资料。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词

声明

前言

一、血管的正常结构和功能

二、血管重构

三、研究意义和理论依据

第一章 小鼠VSMCs的分离鉴定培养

第二章 AGEs的制备与鉴定

第三章 机械牵张力或/和AGEs对细胞MAPKs的影响

结论

参考文献

附图

致谢