机械牵张力与氧化型低密度脂蛋白协同促进大鼠血管平滑肌细胞脂质摄取和MAPKs激活的研究

摘要

目的： 用机械牵张力(stretch stress)和/或氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein，oxLDL)刺激大鼠血管平滑肌细胞(Rat vascular smooth muscle cells，RVSMCs)，研究机械牵拉力对RVSMCs摄取oxLDL的影响及其分子机制，探讨高血压与高血脂协同促进动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)发生的机制。 实验方法： (1)体外分离大鼠主动脉中膜，组织块贴壁法原代培养RVSMCs，并进行形态学和生物化学鉴定(分别用光镜和Western blot的方法)。 (2)高速离心法分离血浆中的LDL(native LDL，nLDL)，用硫酸铜对其进行氧化，获得oxLDL；用琼脂糖凝胶电泳鉴定分离的nLDL和oxLDL。 (3)用nLDL和oxLDL分别培养RVSMCs一定时间后用油红染色检测细胞对脂质的摄取，用MTT的办法检测细胞活性。 (4)不同浓度的nLDL、oxLDL、机械牵张力分别作用于RVSMCs，用Western blot的方法进一步检测MAPKs的激活； (5)用oxLDL和机械牵张力共同作用于RVSMCs，Western blot的方法检测MAPKs的磷酸化水平的变化。并利用总胆固醇试剂盒检测细胞的总胆固醇含量。 结果： (1)7天左右有细胞从组织块中长出，14天铺满培养瓶。细胞呈长梭型和谷峰样的外观，细胞表达平滑肌特异抗原α—actin。 (2)离心后，LDL与血浆其他成分分界清晰，蛋白定量检测显示LDL的浓度较高，琼脂糖电泳显示LDL在血浆β脂蛋白对应处，且条带单一，oxLDL的迁移率明显高于nLDL； (3)油红染色显示nLDL和oxLDL可以诱导RVSMCs细胞内脂质含量增加；10-200μg/ml的nLDL和oxLDL均可使RVSMCs的活性增高，但是相同浓度的oxLDL的作用强于nLDL的作用。 (4)Western blot显示：机械牵拉力和oxLDL均可以导致MAPKs的磷酸化，而oxLDL和机械牵张力可以协同促进细胞MAPKs的磷酸化。 (5)总胆固醇实验显示：oxLDL以及机械牵拉力可以分别提高RVSMCs总胆固醇的浓度，而机械牵张力与oxLDL共同作用可协同促进RVSMCs对总胆固醇的摄取，亦即：细胞内总胆固醇浓度大于单独oxLDL或机械牵张力刺激的RVSMCs细胞总胆固醇的浓度。 结论：机械牵张力和oxLDL可分别促进RVSMCs MAPKs的磷酸化以及细胞对总胆固醇的摄取，而两者同时存在时可起明显的协同促进作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：主要英文缩写词汇表

声明

前言

第一章 RVSMCs的分离鉴定培养

1.1材料

1.2方法

1.3结果

1.4讨论

第二章 LDL的提取，氧化和鉴定

2.1材料

2.2方法

2.3、结果

2.4讨论

第三章 机械牵张力或/和oxLDL对MAPKs的影响

3.1材料

3.2方法

3.3结果

3.4讨论

第四章 机械牵张力或/和oxLDL对RVSMCs脂质化的影响

4.1材料

4.2方法

4.3结果

4.4讨论

结论

参考文献

附图

致谢