ARB对小鼠脑缺血再灌注损伤早期炎性反应的影响

摘要

背景：脑卒中是最常见的脑血管疾病，其发病率和致死率都很高。近期的研究表明，脑内肾素-血管紧张素系统(RAS))与脑缺血的关系密切，阻滞RAS对预防脑卒中有重要作用。研究证实，血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)参与缺血性脑损害的病理过程，血管紧张素Ⅱ受体阻断剂(ARB)具有独立于降压以外的脑保护作用，阻断血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)可减轻脑缺血再灌注损伤。目前，关于ARB对脑缺血/再灌注损伤早期炎性反应影响的相关文献甚少。
　　 目的：通过阻断大脑中动脉阻塞模型(MCAO)模型小鼠的AT1受体，以探讨ARB对脑缺血再灌注损伤早期炎性反应的影响、脑保护作用并分析其机制。
　　 方法：⑴建立小鼠MCAO模型。在C57BL/6J系小鼠上建立大脑中动脉阻塞模型，缺血1h/再灌注11h，采用氯化三苯基四氮唑染色(TTC)染色观察脑梗塞面积，确定小鼠MCAO模型成功。⑵观察AT1受体阻断剂-替米沙坦预处理对小鼠MCAO缺血再灌注损伤模型预后的影响。选用8w龄C57BL/6J系小鼠30只，适应性喂养1周后，随机分为3组，三组采用相同办法复制MACO模型。其中对照组，不进行ARB预干预，缺血1h/再灌注11h；缺血-1组为缺血1h/再灌注6h；缺血-2组为缺血1h/再灌注11h。缺血组给予小鼠替米沙坦0.3mg/(kg.d)灌胃，给药时间8周，对照组给予等量蒸馏水灌胃，普通饲料喂养。各组均于8周后建立脑缺血/再灌注损伤模型。采用尾袖法在设定的时间点监测动物血压。缺血1h，分别再灌注6h、11h后处死动物，取脑组织置于脑切片模具内，由前至后冠状面2mm间隔切取组织片7片，切片厚度5μm。观察动物死亡率、神经功能缺陷评分、脑组织含水量的改变以及梗塞面积的测定。记录三组小鼠缺血再灌注前后肝肾功能结果。⑶免疫组化染色切片，切片均取自冠状切片第3、4切片，在光学显微镜下选取梗塞周边区皮层5个不重复部位的高倍(40×10)视野，进行IL-1β、TNF-α阳性细胞计数，同时计数对侧相应区域5个不重复部位的高倍(40×10)视野。
　　 结果：①小鼠MCAO模型TTC染色后梗塞组织呈白色，缺血再灌注中心区位于纹状体外侧和额顶叶皮质，与MCA支配的脑区域一致，未缺血部分呈红色为正常脑组织，缺血半暗区位于纹状体外侧和额顶叶皮质上部，表明MCAO模型制作成功。②替米沙坦预处理组对MACO小鼠脑缺血再灌注后肝肾功能、动物血压、梗塞面积无明显影响；与对照组比较，脑组织含水量明显减少，神经学评分明显优于对照组；动物死亡率明显低于对照组。上述结果综合说明缺血再灌注损伤发生后，应用替米沙坦预处理能明显改善缺血再灌注损伤程度，并改善其预后。③缺血对侧半球有少量的TNF-α、IL-1β阳性细胞表达，均较恒定，各组间无明显差异。TNF-α、IL-1β阳性细胞计数分布区域以缺血周围区的皮质最多，TNF-α、IL-1β阳性细胞的表达量较非缺血区有明显的增加，有显著性差异；与对照组相比，缺血1组、缺血2组表达量较少，有显著性差异；缺血1组、缺血2组之间表达相似，两者无显著性差异；缺血半暗区IL-1β、TNF-α阳性细胞的表达量较非缺血区有显著增加，但低于缺血区，各区间比较均有显著差异。上述结果提示替咪沙坦预处理减少了脑缺血所致的早期炎症反应。
　　 结论：ARB类药物-替米沙坦预处理降低了脑缺血再灌注损伤早期脑组织炎性细胞因子TNF-α、IL-1β的水平。在未改变肝肾功能和血象的前提下，改善了模型动物的神经功能评分，并降低死亡率改善了再灌注损伤所致的脑水肿。

目录

文摘

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论文说明:英文缩写词表

声明

第1章前言

1.1脑缺血再灌注损伤

1.2血管紧张素Ⅱ受体在脑缺血再灌注损伤中的作用

第2章实验材料

2.1药品和试剂

2.2仪器

2.3实验动物

第3章实验方法

3.1动物分组及给药方法

3.2中脑动脉梗塞模型(middle cerebral artery occlusion，MCAO)制备方法

3.3取材及各项指标测定

3.4.统计学处理

第4章实验结果

4.1小鼠MCAO模型成功制备

4.2实验结果

4.3实验三结果

第5章讨论

5.1肾素－血管紧张素－醛固酮系统(RAS)与缺血性脑卒中

5.2炎性级联反应在缺血性脑卒中的作用

5.3 MCAO小鼠模型成功复制缺血再灌注损伤病理过程

5.4替米沙坦显示了对MCAO模型小鼠缺血再灌注脑损伤独立于降压效果之外的的炎症抑制作用

5.5替米沙坦显示了对MCAO模型小鼠缺血再灌注损伤性脑水肿的抑制作用

5.6替米沙坦改善了MCAO模型小鼠的神经功能评分

第6章结论

参考文献

致谢