开文通对脑缺血再灌注损伤炎性反应的影响

摘要

目的：
　　本研究对脑缺血再灌注损伤进行不同剂量长春西汀干预，检测不同时间点炎性因子的表达变化，以求进一步探讨长春西汀对大鼠脑缺血再灌注损伤炎性反应机制的影响，为长春西汀作为抗炎制剂在临床中的应用提供理论依据。
　　方法：
　　将Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注损伤组和长春西汀中剂量组，长春西汀大剂量组，应用线栓法制备大脑中动脉闭塞2h后再灌注模型，分别于再灌注6h、12h、24h、3d进行神经功能评分，采用2，3，5-氯化三苯基四氮唑（2，3，5-triphenyi terazoloride，TTC）染色法检测脑梗死灶体积大小，采用干、湿重法检测脑组织含水量以评价脑水肿的程度，通过HE染色观察神经元变性坏死，采用免疫组织化学、原位杂交和蛋白印迹实验的方法检测大鼠核转录因子(nuclear factor-kappa B，NF-κB)、肿瘤坏死因子（TNF-α）的表达变化。
　　结果：
　　神经功能评分:假手术组无神经功能评分缺损，其余各组神经功能缺损评分均显著增高(P＜0.01);与模型组比较，开文通中、大剂量组在12h和24h、3d时点神经功能缺损评分降低有显著差异(P＜0.05);开文通不同剂量组3d时间点神经功能缺损评分降低有显著差异(P＜0.05)。
　　脑梗死体积测定:假手术组经TTC染色无脑梗死出现，其余组别脑梗死体积均显著增高(P＜0.01);与模型组比较，开文通干预组在24h、3d时间点和脑梗死体积降低有显著差异(P＜0.05);开文通不同剂量组24、3d时脑梗死体积降低有显著差异(P＜0.05)。
　　HE染色:光镜下缺血再灌注后6h即能观察到神经细胞核固缩，形态变形，神经元周围未见明显水肿，至再灌24h和3d时损害效应明显，可见大量深染的神经元细胞核，核固缩、致密，大部分细胞正常结构消失，水肿明显。
　　NF-κB的免疫组化测定:与假手术组比较，其余各组NF-κB的阳性表达均有显著差异(P＜0.01);与模型组比较，开文通干预组都在12h-3d时点NF-κB的阳性表达降低有显著差异(P＜0.01);开文通不同剂量组24h、3d时点NF-κB的阳性表达降低有显著差异(P＜0.01)。
　　TNF-α的免疫组化测定:与假手术组比较，其余各组TNF-α的阳性表达均有显著差异(P＜0.01);与模型组比较，开文通干预组在24h、3d时点TNF-α的阳性表达降低有显著差异(P＜0.01)，开文通大剂量组12h时点TNF-α的阳性表达降低也有显著差异(P＜0.01);开文通不同剂量组24h、3d时点TNF-α的阳性表达降低有显著差异(P＜0.01)。
　　Western blot测定Nucleus P65表达:与假手术组比较，12h时模型组和长春西汀大剂量治疗组NF-κB表达增高有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较，12h长春西汀大剂量组NF-κB表达降低有统计学意义(P＜0.05)，核内的P65亚基表达在24h时点达到了高峰，24h时点NF-κB的P65表达增高相较其余时点有统计学意义(P＜0.05)，48h仍维持较高的活化水平，但较24h表达下降。
　　原位杂交测定NF-κB mRNA表达:与模型组比较，开文通中剂量组在12h-3d时间点NF-κBmRNA的阳性表达降低有显著差异(P＜0.01);与模型组比较，开文通大剂量组4个时间点NF-κB的阳性表达降低有显著差异(P＜0.01);与开文通中剂量组比较开文通大剂量组12h-3d时间点NF-κB的阳性表达降低有显著差异(P＜0.01);组内比较在24h时间点，三组阳性表达有显著差异(P＜0.01)。
　　原位杂交测定TNF-αmRNA表达:与模型组比较，开文通中剂量组在12h、24h、3d时间点TNF-αmRNA的阳性表达降低有显著差异(P＜0.01);与模型组比较，开文通大剂量组4个时间点TNF-α的阳性表达降低有显著差异(P＜0.01);与开文通中剂量组比较开文通大剂量组24h、3d时间点TNF-α的阳性表达降低有显著差异(P＜0.01);组内比较在24h时间点，三组阳性表达有显著差异(P＜0.01)。
　　结论：
　　通过免疫组化和蛋白印迹实验等研究，显示长春西汀对大鼠脑缺血再灌注损伤炎性反应通路有明显的抑制作用，应用长春西汀进行干预后，NF-κB和TNF-α在各时间的的表达均有所降低，而且基本在24h和3d时表达水平下降有统计学意义，神经功能评分和脑梗死体积均有所改善。

目录

声明

摘要

缩略语／符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

对象和方法

结果

讨论

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

附录

综述 长春西汀与脑缺血／再灌注损伤中炎症反应的防治

致谢