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【6h】

基于固定化TRPV1通道蛋白的生物传感器的构建与应用

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第一章 绪 论

1.1 味觉信号研究概况

1.2 辣味及其传感

1.3 TRPV1通道蛋白研究进展

1.3.1 TRPV1的分子结构

1.3.2 TRPV1的组织分布

1.3.3 TRPV1的生物学特性

1.4 电化学生物传感器概述

1.5 立题背景、意义及依据

第二章 固定化SD大鼠味蕾组织生物传感器的研究

2.1 仪器设备与实验材料

2.1.1仪器设备

2.1.2 实验材料

2.2 实验方法

2.2.1玻碳电极的预处理

2.2.2味蕾组织的收集

2.2.3味蕾组织传感器的制备

2.2.4辣椒素与TRPV1拮抗剂的检测

2.2.5 TRPV1拮抗剂的高热作用

2.2.6 数据处理

2.3 结果与讨论

2.3.1 玻碳电极的预处理表征

2.3.2辣椒素与TRPV1的作用规律

2.3.3辣椒素-TRPV1拮抗剂混合物与TRPV1的作用规律

2.3.4 TRPV1拮抗剂的高热作用

2.4 小结

第三章 人源TRPV1通道蛋白表达体系的建立

3.1仪器设备与实验材料

3.1.1仪器设备

3.1.2 实验材料

3.2 哺乳动物细胞表达系统

3.3.1 TRPV1蛋白基因序列

3.3.2 蛋白表达载体

3.4 工程菌的扩增培养

3.4.1 工程菌的复苏

3.4.2 工程菌的扩增

3.4.3 工程菌的冻存

3.5 TRPV1蛋白基因表达质粒的提取

3.6.1 HEK293T细胞培养

3.6.2 脂质体转染

3.7.1 G418选择性培养基

3.7.2 细胞株的筛选与扩增

3.8.1 质粒及TRPV1基因的鉴定

3.8.2 TRPV1通道蛋白的鉴定

3.9 小结

第四章 基于TRPV1-HEK293T细胞的细胞膜传感器的构建

4.1 仪器设备与实验材料

4.1.1仪器设备

4.1.2 实验材料

4.2 实验方法

4.2.1 TRPV1-HEK293T细胞培养

4.2.2细胞膜的制备

4.2.3还原氧化石墨烯的制备

4.2.4 纳米金的制备

4.2.5 细胞膜传感器的组装

4.2.6 基于细胞膜传感器的辣味物质检测

4.3 数据处理与分析

4.4 结果与讨论

4.4.1还原氧化石墨烯的表征

4.4.2纳米金的表征

4.4.3细胞膜传感器组装过程表征

4.4.4 辣味物质检测

4.4.5 稳定性和重复性考察

4.5 小结

第五章 总结与讨论

5.1 讨论

5.2 结论

5.3 研究创新点

第六章 展望

参考文献

发表论文及参加科研情况说明

致谢

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