双水相萃取法从桑蚕蛹等三种原料中提取SOD的工艺研究

摘要

目前国内外对超氧化物歧化酶(SOD)的研究，主要集中在动物组织、植物中提取的SOD，因动物体内SOD含量多，活性高，但是动物组织提取的SOD安全性低，含有致热因予等缺陷。而植物中SOD含量低。为了开发SOD含量多、活性高、缺陷少的资源丰富的原料，本文以条件温和、产品活性损失小、处理量大，分离步骤少，无有机溶剂残留等优点的双水相萃取分离法在黄粉虫、啤酒酵母和桑蚕蛹三种原料中，进行提取纯化SOD比较研究。 本实验确定了双水相筚取提取SOD工艺流程，研究了双水相体系最佳条件：提取黄粉虫和蚕蛹中SOD最佳双水相体系的质量组成为聚乙二醇浓度12％，磷酸钾浓度24％，pH7.1；提取啤酒酵母SOD最佳双水相体系的质量组成为聚乙二醇浓度10％，磷酸钾浓度24％，pH7.3。在此条件下测定出黄粉虫中提取的SOD比活力达到3.7 U·mg-1蛋白质，SOD纯化倍数达3.74，酶活性回收率达71％；啤酒酵母中提取SOD的比活力达到15.5 U·mg-1蛋白质，SOD纯化倍数达2.18，酶活性回收率达47.8％；蚕蛹中提取SOD的比活力达到102.0U·mg-1蛋白质，SOD纯化倍数达2.91，酶活性回收率达73.9％。综合SOD提取的比活力、酶活力回收率和纯化倍数三个因素考虑，本文认为蚕蛹是最佳原料。 采用SDS-PAGE法测定了SOD分子量：黄粉虫中提取的SOD分了量为33.2kDa；蚕蛹中提取的SOD分子量为31.0kDa；啤酒酵母中提取的SOD分了量为38.2kDa。并鉴定三种原料中提取的SOD都是CuZn-SOD。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章 前言

1.1超氧化物歧化酶与氧自由基的概述

1.2超氧化物歧化酶的类型

1.3超氧化物歧化酶的物理化学性质

1.4超氧化物歧化酶的应用

1.5超氧化物歧化酶提取原料

1.6超氧化物歧化酶提取方法研究进展

1.7双水相萃取技术概述

1.8超氧化物歧化酶活性的研究现状

1.9本文研究的意义

1.10本文研究的主要内容

第二章 材料与方法

2.1实验材料

2.2超氧化物歧化酶提取工艺流程

2.3超氧化物歧化酶活力测定方法

2.4蛋白质浓度测定方法

2.5聚乙二醇/磷酸钾双水相相图建立

2.6双水相中不同pH配置

2.7双水相萃取操作方法

2.8透析

2.9超氧化物歧化酶分了量和纯度的鉴定

第三章 结果与讨论

3.1黄粉虫中超氧化物歧化酶提取研究

3.2啤酒酵母中超氧化物歧化酶提取研究

3.3蚕蛹中超氧化物歧化酶提取研究

3.4三种原料提取超氧化物歧化酶情况比较

3.5酶种类的鉴定

第四章结论

4.1研究的结果

4.2研究的创新点

4.3研究中需进一步解决的问题

4.4展望

参考文献

发表论文、参加科研情况说明

致谢