声明
第一章 文献综述
1.1 木聚糖酶的概述
1.1.1 木聚糖降解酶系
1.1.2 木聚糖酶的结构
1.1.3 木聚糖酶的理化性质
1.2 木聚糖酶的异源表达
1.2.1 木聚糖酶在大肠杆菌中的异源表达
1.2.2 木聚糖酶在枯草芽孢杆菌中的异源表达
1.2.3 木聚糖酶在毕赤酵母中的异源表达
1.2.4 木聚糖酶在酿酒酵母中的异源表达
1.2.5 木聚糖酶在丝状真菌中的异源表达
1.2.6 木聚糖酶在植物表达系统中的表达
1.3 多克隆抗体的概述
1.3.1 抗体的分类
1.3.2 多克隆抗体的制备
1.3.3 多克隆抗体的应用
1.4 酿酒酵母表达系统
1.5 数字PCR简介
1.6 研究的目的及意义
1.7 研究的主要内容
1.8 技术路线
第二章 黑曲霉木聚糖酶基因原核表达及多克隆抗体的制备
2.1 实验材料及设备
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验设备
2.2 实验方法
2.2.1原核表达载体的构建
2.2.2 BL21转化子的筛选及鉴定
2.2.3 IPTG诱导转化子产木聚糖酶表达条件优化
2.2.4 木聚糖酶蛋白的纯化
2.2.5 制备重组木聚糖酶多克隆抗体及效价评价
2.2.6Western blot检验木聚糖酶多克隆抗体与木聚糖酶蛋白的结合能力
2.3 结果与分析
2.3.1 黑曲霉总RNA的提取
2.3.2 木聚糖酶基因的克隆
2.3.3 pET28a-xynB载体的构建
2.3.4 木聚糖酶蛋白的诱导表达条件优化
2.3.5 重组木聚糖酶的纯化
2.3.6 检测木聚糖酶多克隆抗体效价
2.3.8 木聚糖酶多克隆抗体于木聚糖酶蛋白的结合能力
2.3 讨论
2.4 小结
2.4.1 黑曲霉木聚糖酶基因原核表达及纯化
2.4.2 重组木聚糖酶多克隆抗体的制备
第三章 酿酒酵母表达系统中木聚糖酶蛋白定量分析
3.1 实验材料及方法
3.1.1 实验材料
3.1.3 实验设备
3.2 实验方法
3.2.1 引物及探针
3.2.2 pYES2-PαXC-rDNA质粒的提取
3.2.3 rDNA整合法构建随机多拷贝木聚糖酶酿酒酵母工程菌
3.2.4 微滴数字PCR检测转化子拷贝数
3.2.5 不同xynB基因拷贝数酿酒酵母菌体及发酵液中蛋白提取
3.2.6 xynB基因多克隆抗体血清在酿酒酵母表达系统中的应用
3.3 结果与分析
3.3.1 尿嘧啶营养缺陷对阳性转化子的筛选
3.3.2. ddPCR对阳性转化子拷贝数检测
3.3.3 xynB多克隆抗体血清在酿酒酵母表达系统中的应用
3.4 讨论
3.5 小结
3.5.1 rDNA整合法构建随机多拷贝酿酒酵母工程菌及拷贝数鉴定
3.5.2 木聚糖酶基因拷贝数，蛋白表达量，蛋白分泌量之间关系
第四章 结论
参考文献
作者简介
致谢
