牛奶中主要过敏原的消除及检测技术的研究

摘要

本论文使用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶对市售牛奶进行水解，通过正交实验优化，并用牛奶过敏者血清测定其水解效果。研究表明，胰蛋白酶的最适水解条件为温度在40℃，pH8.0，酶与底物质量比为5％，水解时间为3小时，木瓜蛋白酶的水解最佳条件为65℃，pH6.5，酶与底物质量比为4％，水解时间为3小时，菠萝蛋白酶的最佳水解条件为60℃，pH6.5，酶与底物质量比为4％，水解时间为2小时。在酶的最佳水解条件下，用三种酶依次对牛奶进行水解，水解后的奶液对牛奶过敏者血清特异性IgE的抗原性最小，在可测定的范围内，几乎已经不表现出抗原性。经分析表明，牛奶中的几种主要的过敏原表位存在着上述实验用酶的识别位点，用蛋白酶水解时，酶分子对过敏原的表位进行攻击，破坏过敏原表位的结构，从而消弱或消除了牛奶蛋白的过敏原性。 本实验利用建立的过敏性动物模型的血清，作为参照血清，对实验所用的过敏者血清的特异性进行了验证。结果表明，此例牛奶过敏者血清中的抗体，对牛奶中过敏原蛋白是特异性的，并且初步建立了利用牛奶过敏者血清对酶解后的牛奶中过敏原抗原性程度的ELISA检测。本实验通过动物模型，检测了几种细胞因子对机体免疫功能的调节作用。结果表明，豚鼠分别口服和注射抗原后，佐剂、干扰素、白介素一2可以提高体内特异性IgE和IgG的含量，白介素-11对体内特异性IgE和IgG有降低的效果。

目录

文摘

英文文摘

第一章前言

1.1课题的研究背景

1.2国内外研究动态及趋势

1.3课题的研究依据

1.4牛奶中超敏原种类及理化性质

1.5课题的研究意义

第二章材料与方法

2.1非牛奶过敏者血清IgE对未水解牛奶蛋白质抗原性的测定

2.2牛奶过敏者血清特异性IgE对未水解牛奶蛋白抗原性的测定

2.3牛奶过敏者血清和非牛奶过敏者血清对卵清蛋白抗原性的测定

2.4牛奶的酶解

2.5牛奶酶解液的处理

2.6牛奶过敏者血清特异性IgE对酶解后牛奶蛋白抗原性的测定

2.7非牛奶过敏者血清IgE对酶解后牛奶蛋白抗原性的测定

2.8豚鼠过敏模型的建立

2.9过敏豚鼠血清特异性IgE的检测

第三章结果

3.1人血清IgE对未水解牛奶蛋白过敏原性的测定

3.2豚鼠血清IgE对抗原特异性的测定结果

3.3人血清IgE对卵清白蛋白过敏原性的测定

3.4牛奶酶解效果的测定

3.5细胞因子对豚鼠自身免疫的影响

第四章分析与讨论

4.1 ELISA最佳检测条件的确定

4.2结果判定

4.3影响ELISA因素

4.4蛋白酶水解正交实验的结果分析

4.5三种酶对牛奶中过敏原蛋白的酶解识别位点

4.6牛奶中过敏原蛋白酶解后抗原性的变化

4.7对卵清白蛋白检测的意义

4.8以卵清白蛋白为抗原建立过敏动物模型的意义

4.9豚鼠过敏模型的建立

4.10细胞因子对机体免疫的调节

第五章结论

5.1本实验的基本成果

5.2实验中存在的问题及进一步工作设想

参考文献

发表论文、参加科研情况说明以及学位论文使用授权声明

致谢